安定した濃度勾配で細菌走化性を定量化するためのマイクロ流体デバイス
Summary
このプロトコルは、chemoeffectorsの安定した濃度勾配で細菌の走化性を調べるためのマイクロ流体デバイスの開発を説明します。
Abstract
走化性は、細菌が誘引物質の源にアプローチするか、撥化学物質の発生源を避けることができます。細菌は、常に数秒前の検出濃度に現在の濃度を比較することによって、特定のchemoeffectorsの濃度を監視する。この比較では、運動の正味の方向を決定します。複数の、競合する勾配がしばしば自然の中で共存していますが、細菌の走化性を調査するための従来のアプローチは、誘引と忌避剤の濃度勾配に反応して移行を定量化するための次善のです。ここで、我々は、細菌にchemoeffectorsの正確で安定した濃度勾配を提示し、定量的に適用される勾配への応答を調べるためのマイクロ流体走化性モデルの開発について説明します。デバイスは、任意の所望の絶対濃度と勾配の強さのその濃度勾配で汎用性が容易に拡散混合によって生成することができます。デバイスは、応答のを使用して示されている<em>大腸菌</emアミノ酸とニッケルイオンの勾配へ> RP437。
Protocol
1。標準のSU – 8フォトリソグラフィー1（ このビデオでは図示せず）を用いてシリコンのマスターの作製。 マイクロ流体ネットワークと走化性チャンバーを含むPDMSモールドを製造するためのSU – 8"マスター"（SU – 8 2025、マイクロケム、ニュートン、MA）を作成するための標準的なSU – 8フォトリソグラフィーの手法を使用してください。このようなマスターの…
Discussion
真央ら 5で説明される走化性の分配係数（CPC）と走化性の移行係数（CMC）を計算することができます。細胞が高濃度側で検出された場合は低濃度側で検出されたセルは、-1の値を与えているのに対し、それは、+1の値を与えられます。値は合計し、単価を生成するセルの合計数によって分けられています。 CPC（正または負）の符号は、移行の方向（信号から向かってまたは離れ…
Acknowledgements
この作品は、国立科学財団（CBET 0846453）によって部分的にサポートされていました。
References
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Cite This Article
Englert, D. L., Manson, M. D., Jayaraman, A. A Microfluidic Device for Quantifying Bacterial Chemotaxis in Stable Concentration Gradients. J. Vis. Exp. (38), e1779, doi:10.3791/1779 (2010).