Summary
我们描述了一种快速，灵敏的定量小脑共济失调的小鼠模型中的疾病严重程度的协议。措施包括后肢紧握着，窗台测试，步态和后凸。该协议有效地区别对待受影响的和非受影响的个人，以及检测，随着时间的推移受影响的个人的进展。
Abstract
我们描述了一种快速，灵敏的定量小脑共济失调的小鼠模型中的疾病严重程度的协议。这是来自先前公布的表型在一些疾病模型评估，包括脊髓小脑共济失调，亨廷顿氏病和spinobulbar肌肉萎缩。措施包括后肢紧握着，窗台测试，步态和后凸。记录每一个措施是0-3分，与0-12的所有四项措施的总和。结果有效区分影响和非受影响的个人，同时也量化的神经退行性疾病表型的时间进展。措施可以单独分析，或结合成一个更大的统计力量的综合表型得分。理想的组合描述的四个措施将取决于问题的障碍。我们目前用来评估疾病的严重程度在脊髓小脑性共济失调7型（SCA7）的转基因小鼠模型的协议的一个例子。
阿尔伯特R.拉斯帕达和Gwenn A.花园贡献同样这个手稿。
Protocol
为了避免偏见，实验者进行的评估不应该有动物的基因型知识。个别措施，取得了0-3分，0代表没有相关的表型和代表的最严重的表现的3。每个测试进行多次，以确保将比分是可重复的的。肥胖会所述的所有措施的解释复杂化。研究者不妨权衡表型的得分，以评估的结果可能发挥的作用，肥胖的老鼠。
礁测试
窗台测试是一个直接的措施，协调，这是在小脑共济失调和许多其他神经退行性疾病中受损。这项措施是最直接可比人类小脑共济失调的迹象。
- 电梯从笼子里的鼠标和它放在笼子里的窗台上。老鼠通常会沿着窗台，企图入笼下降。
- 观察鼠标，因为它走笼窗台，并降低其笼。野生型的小鼠通常会沿着窗台，而不会失去其平衡，会降低入笼优雅，用它的爪子。这是分配的得分为0。如果鼠标失去其立足点而沿窗台走，但在其他方面出现的协调，它接收到1分。如果没有有效地利用它的后腿，发挥得淋漓尽致，而不是它的爪子或土地入笼下降时，它接收到2分。如果脱落的窗台，或接近，而步行或试图降低自己，或动摇，并拒绝移动尽管鼓励所有，它接收到3分。有些老鼠会需要一个温柔的微调，以鼓励他们沿着窗台，或入笼下降。
- 记录窗台测试得分。
后肢紧握
后肢紧握的病情恶化，在小鼠模型的神经退行性疾病，包括某些小脑共济失调[1]的标记。
- 抓住它的基地附近的尾巴，并解除所有周围的物体清晰的鼠标。
- 观察10秒的后肢位置。如果坚持后肢叉开向外，从腹部，它是分配的得分为0。如果一个后肢是朝着腹部的暂停时间超过50％的翻供，它接收到1分。如果两个后肢部分收回对暂停的时间超过50％的腹部时，它接收一个2分。如果它的后肢完全缩回，触摸腹部的暂停时间超过50％，它接收一个3分。
- 将鼠标放回笼子里，并记录其后肢紧握得分。
步态
步态是一个协调和肌肉功能的措施。
- 鼠标从笼中取出，并放置在一个平坦的表面，其头部远离研究者面临。
- 观察鼠标，从后面行走。如果鼠标移动正常，支持其体重四肢，腹部不接触地面，并与后肢均参加均匀，收到了0分。如果它显示了震颤，或出现跛行，行走时，它接收1分。如果它显示了剧烈震颤，严重跛行，降低骨盆，或从身体，脚点在运动（“鸭脚”），它接收到2分。如果鼠标有困难向前迈进，并拖动它的腹部，沿地面的，它接收一个3分。
- 将鼠标放回笼子里，并记录其步态评分。
脊柱后凸
后凸畸形的一个特点是背的脊柱弯曲，常见的表现是神经退行性疾病小鼠模型[2]。这是由于继发于神经退行性病变的脊髓肌肉中的肌张力损失。
- 鼠标从笼中取出，放置在一个平面上上。
- 观察它，因为它走。如果鼠标是能够很容易地拉直脊柱，因为它散步，不具有持久性脊柱后凸的，它接收得分为0。如果鼠标表现出轻度的脊柱后凸畸形，但能够理顺其脊椎，它接收到1分。如果不能彻底整顿其脊椎，并保持持续，但轻度后凸，它接收到2分。如果鼠标保持着明显的后凸畸形，如散步或而坐，它被分配一个3分。
- 将鼠标放回笼子里，并记录其后凸得分。
代表性的成果
有了足够数量的动物，这个程序能够检测菌株间内随着时间的推移一脉相承的表型差异。进行数据分析，计算所采取的每项措施的得分平均每一个人的三个测量。措施可以单独分析，或结合成复合材料的表型得分为各个。
图表中的数据和应用适当的统计方法来确定的意义。图1显示了从转基因小鼠SCA7模型的复合的表型评估的结果。在此floxed SCA7 - 92Q的转基因模型，两侧是人类ataxin - 7基因与92个CAG重复loxP位的网站，并从细菌人工染色体表达。复合材料的表型得分的紧握着，窗台走路，步态最大可能得分12和后凸评估。逐步SCA7在floxed SCA7 - 92Q的转基因小鼠的表型表现出越来越大的复合表型的得分，这与人类疾病的逐步性质是一致的。
图1 Floxed SCA7 92Q小鼠表现出一个渐进的SCA7表型，即开始显着不同的非转基因窝，在20周（2方差分析 ：Bonferroni事后; *** P < 0.001）。一个窗台测试每0-3规模的小鼠进行了评估，紧握着，步态和后凸畸形。每个基因型的平均综合得分，每个年龄计算。酒吧代表教育统筹局局长。
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Discussion
此协议是专为小脑共济失调的小鼠模型中的疾病严重程度的一个敏感和容易执行的评价。的打分系统的各个组件将在不同的神经退行性疾病小鼠模型或多或少有效。
这个评分系统的元素都被有效地用于评估的各种人类神经退行性疾病的小鼠模型，包括小脑共济失调，亨廷顿氏病和spinobulbar性肌萎缩症[1-3]。测试的理想组合将取决于问题的障碍。该协议最初是由作者设计，评估脊髓小脑共济失调7型（SCA7）的转基因小鼠模型。
在这里介绍的数据生成的SAC7模型，处死动物的行为异常，如果进展到一个阶段的动物不再是足够的移动独立维持营养或水化在40-43周或更早的年龄。
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Disclosures
这些研究的大学华盛顿机构动物护理和使用委员会批准。
Acknowledgments
这项工作是支持由美国国立卫生研究院拨款NS052535聚糖EY014061＆EY014997的ARL，以及UL1DE019583 - 02财团奖。
References
- Chou, A. H. Polyglutamine-expanded ataxin-3 causes cerebellar dysfunction of SCA3 transgenic mice by inducing transcriptional dysregulation. Neurobiol Dis. 31 (1), 89-101 (2008).
- Thomas, P. S. Jr Loss of endogenous androgen receptor protein accelerates motor neuron degeneration and accentuates androgen insensitivity in a mouse model of X-linked spinal and bulbar muscular atrophy. Hum Mol Genet. 15 (14), 2225-2238 (2006).
- Ditzler, S., Stoeck, J., LeBlanc, M., Kooperberg, C., Hansen, S., Coppin, L., Olson, J. M. A Rapid Neurobehavioral Assessment Reveals that FK506 Delays Symptom Onset in R6/2 Huntington's Disease Mice. Preclinica Research Articles. 1 (3), 115-126 (2003).
