Summary
Este protocolo demonstra métodos para a extração de espermatozóides dos testículos dos machos e depois inseminação camundongos fêmeas. Este procedimento é útil quando o tempo preciso é necessário em estudos de desenvolvimento bem como o trabalho transgênicos.
Abstract
Roedores do gênero Peromyscus (ratos de cervos) são os mais prevalentes mamíferos nativos da América do Norte. Peromyscus espécies são usadas em uma ampla gama de investigação, incluindo toxicologia, epidemiologia, ecologia, comportamento, e estudos genéticos. Aqui eles fornecem um modelo útil para demonstrações de inseminação artificial.
Métodos semelhantes aos apresentados aqui foram usadas anteriormente em estudos com ratos vários veados, mas nenhum protocolo detalhado foi publicado. Aqui demonstramos o método básico de inseminação artificial. Este método consiste na extração dos testículos dos roedores, em seguida, isolar os espermatozóides do epidídimo e canal deferente. O espermatozóide maduro, agora em uma mistura de leite, são colocados no aparelho reprodutivo da fêmea no momento da ovulação. Fertilização é contado como 0 dias para o sincronismo do desenvolvimento embrionário. Embriões pode ser recuperado no tempo desejado ponto-e manipulado.
A inseminação artificial pode ser usado em uma variedade de espécies de roedores onde o tempo exato de embriões é crucial ou difícil de obter. Esta técnica é vital para as espécies ou variedades (incluindo a maioria Peromyscus) que não podem companheiro imediatamente e / ou onde o acasalamento é difícil de avaliar. Além disso, a inseminação artificial proporciona tempo exato para o desenvolvimento do embrião ou no mapeamento progresso do desenvolvimento e / ou trabalho transgênicos. Redução do número de animais pode ser usado desde a fecundação é garantida. Este método tem sido vital para promover o sistema Peromyscus, e esperamos beneficiar os outros também.
Protocol
Acknowledgements
Gostaria de agradecer a Mike Dewey do Centro de Ações Peromyscus Genéticos para a sua percepção de valor, paciência e conhecimento sobre a reprodução de roedores.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Petri Dish | Tool | Fisher | 08-772-30 | |
| 18 gauge needle | Tool | Becton Dickinson | 305195 | |
| Powdered milk | Reagent | Any Grocery store | ||
| 1 ml syringe | Tool | National Scientific Company | S7510-1 | |
| Forceps | Tool | Roboz | RS-5060 | |
| Scissors | Tool | Roboz | RS-5882 | |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Reagent | Gibco | 14200-075 | |
| 22 gauge blunt needle | Tool | Give to me |
