Skörd sperma och artificiell insemination av Möss

Summary

Detta protokoll visar metoder för att utvinna spermier från testiklarna på hanar och sedan inseminating honmöss. Detta förfarande är användbart när exakt tid behövs utvecklingsstudier samt transgena arbete.

Abstract

Gnagare av släktet Peromyscus (rådjur möss) är de vanligaste infödda nordamerikanska däggdjur. Peromyscus arter används i ett brett spektrum av forskning inklusive toxikologi, epidemiologi, ekologi, beteende och genetiska studier. Här de ger en användbar modell för demonstrationer av artificiell insemination.

Metoder liknande dem som visas här har tidigare använts i flera studier rådjur mus, men inga detaljerade protokoll har publicerats. Här kan vi visa den grundläggande metoden för artificiell insemination. Denna metod innebär att utvinna testiklarna från gnagare, sedan isolera spermier från bitestiklarna och sädesledarna. Den mogna spermier, nu i en mjölk-blandning, placeras i honans reproduktionsorgan vid tiden för ägglossning. Befruktning räknas som dag 0 för tidpunkten för embryots utveckling. Embryon kan sedan hämtas vid önskad tid-punkt och manipuleras.

Artificiell insemination kan användas i en mängd olika arter av gnagare där exakta embryot timing är avgörande, eller svårt att få. Denna teknik är avgörande för arter eller stammar (inklusive de flesta Peromyscus) som inte kan para sig omedelbart och / eller där parning är svårt att bedöma. Dessutom ger insemination exakt tidpunkt för embryots utveckling antingen i kartläggningen utvecklingsarbete pågår och / eller transgena arbete. Minskat antal djur kan användas då befruktning är garanterad. Denna metod har varit avgörande för att främja Peromyscus systemet, och kommer förhoppningsvis att gynna andra.

Protocol

Artificiell insemination Artificiell insemination används i stället för naturliga parningar för att öka chanserna att alla kvinnor har att bli gravid. 2 män har använts för varje 1 superovulated honor eller en kvinnlig känd för att vara i estrous. Den caudae bitestiklar från mogna hanmöss placerades i en 9% mjölk fjädring och skivad öppna med 18 gauge nålar. Spermierna fick simma fritt i några minuter och sedan bitestiklar togs från blandningen. Suspensionen utvärderades med…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Petri Dish	Tool	Fisher	08-772-30
18 gauge needle	Tool	Becton Dickinson	305195
Powdered milk	Reagent	Any Grocery store
1 ml syringe	Tool	National Scientific Company	S7510-1
Forceps	Tool	Roboz	RS-5060
Scissors	Tool	Roboz	RS-5882
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline	Reagent	Gibco	14200-075
22 gauge blunt needle	Tool	Give to me