Oogsten Sperma en kunstmatige inseminatie van Muizen
Summary
Dit protocol laat zien methoden voor de extractie van sperma van de testikels van de mannetjes en daarna inseminatie vrouwelijke muizen. Deze procedure is handig wanneer precieze tijd nodig is in ontwikkeling studies als transgene werken.
Abstract
Knaagdieren van het geslacht Peromyscus (herten muizen) zijn de meest voorkomende inheemse Noord-Amerikaanse zoogdieren. Peromyscus soorten worden gebruikt in een breed scala van onderzoek met inbegrip van toxicologie, epidemiologie, ecologie, gedrags-en genetische studies. Hier bieden ze een nuttig model voor demonstraties van kunstmatige inseminatie.
Methoden zoals die hier weergegeven zijn eerder gebruikt in verschillende herten muizen studies, nog geen gedetailleerd protocol is gepubliceerd. Hier laten we zien de basis methode van kunstmatige inseminatie. Deze methode houdt in extraheren van de testes van de knaagdieren, dan is het isoleren van de zaadcellen uit de bijbal en zaadleiders. De rijpe zaadcellen, die nu in een melkmengsel, worden in de vrouwelijke reproductieve-darmkanaal op het moment van de ovulatie. Bemesting wordt geteld als dag 0 voor de timing van de embryo-ontwikkeling. Embryo's kunnen worden opgehaald op het gewenste tijdstip-point en gemanipuleerd.
Kunstmatige inseminatie kan worden gebruikt in een verscheidenheid van knaagdiersoort waar exact embryo timing is cruciaal of moeilijk te verkrijgen. Deze techniek is van vitaal belang voor soorten of stammen (waaronder de meeste Peromyscus) die niet kunnen paren onmiddellijk en / of waar paring is moeilijk in te schatten. Daarnaast, kunstmatige inseminatie biedt exacte timing voor de ontwikkeling van het embryo, hetzij in kaart brengen van ontwikkeling vooruitgang en / of transgene werk. Verminderde aantallen dieren kunnen worden gebruikt, omdat de bevruchting is gegarandeerd. Deze methode is van vitaal belang voor het bevorderen van de Peromyscus systeem, en hopelijk profiteren anderen.
Protocol
Acknowledgements
Ik wil Mike bedanken Dewey uit de Peromyscus Genetische Stock Center voor zijn waardevolle inzicht, geduld en kennis over knaagdieren reproductie.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Petri Dish | Tool | Fisher | 08-772-30 | |
| 18 gauge needle | Tool | Becton Dickinson | 305195 | |
| Powdered milk | Reagent | Any Grocery store | ||
| 1 ml syringe | Tool | National Scientific Company | S7510-1 | |
| Forceps | Tool | Roboz | RS-5060 | |
| Scissors | Tool | Roboz | RS-5882 | |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Reagent | Gibco | 14200-075 | |
| 22 gauge blunt needle | Tool | Give to me |
