यह वीडियो सूक्ष्म नमूनों सतहों उपयोग करके प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत के बाद विश्लेषण के साथ प्रयोगों से पता चलता है. दृष्टिकोण करने के लिए जीवित कोशिकाओं में प्रोटीन बातचीत का पता लगाने की संभावना प्रदान करता है और संभावना के साथ उच्च throughput क्षमताओं को जोड़ती है मात्रात्मक जानकारी निकालने.
अणुओं की बातचीत नेटवर्क Unraveling<em> में इन विवो</em> तंत्र है कि सेल समारोह और चयापचय को विनियमित करने को समझने के लिए महत्वपूर्ण है. कोशिकाओं में आणविक मुलाकातों को संबोधित करने के लिए पद्धति विकल्पों में से एक भीड़ को विकसित किया गया है, लेकिन इन तरीकों के सबसे जा रहा है बल्कि परोक्ष और इसलिए शायद ही मात्रात्मक से ग्रस्त है. इसके विपरीत कुछ उच्च अंत मात्रात्मक दृष्टिकोण पेश किए गए, जो तथापि उच्च throughput बढ़ाने के लिए मुश्किल हैं. मात्रात्मक जानकारी निकालने की संभावना के साथ उच्च throughput क्षमताओं गठबंधन करने के लिए, हम हाल ही में प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत की पहचान करने के लिए एक नई अवधारणा है (Schwarzenbacher विकसित<em> एट अल</em>, 2008). यहाँ, हम डिजाइन और इस प्रणाली का निर्माण है जो एक fluorophore लेबल प्रोटीन ("शिकार") और एक झिल्ली प्रोटीन के बीच बातचीत का विश्लेषण करने के लिए अनुमति देता है ("चारा") के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन<em> में इन विवो</em>. कक्ष micropatterned चारा exoplasmic डोमेन के खिलाफ एंटीबॉडी के साथ functionalized सतहों पर चढ़ाया जाता है. चारा – शिकार बातचीत फ्लोरोसेंट शिकार के पुनर्वितरण के माध्यम से assayed हैं. विधि उच्च संवेदनशीलता एकल अणुओं के स्तर तक नीचे, कमजोर बातचीत का पता लगाने की क्षमता है, और उच्च throughput क्षमता की विशेषता है, यह प्रदर्शन उपकरण के रूप में लागू करने.
साथ वीडियो जीवित कोशिकाओं के प्लाज्मा झिल्ली (Brameshuber एट अल, 2009;. Weghuber एट अल, प्रेस में Schwarzenbacher एट अल, 2008) में प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत का पता लगाने के लिए एक विधि दर्शाता है. सिद्धांत रूप में, किसी भी TIRF आधारित माइक्रोस्कोपी मंच readout प्रणाली के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. केवल जब उच्च संवेदनशीलता (जैसे एकल अणुओं का पता लगाने के लिए) वांछित है, उन्नत सूक्ष्मदर्शी की आवश्यकता होगी. सबसे अच्छा परिणाम तैयार करने की प्रक्रिया के दौरान निम्न महत्वपूर्ण बिंदुओं को प्राप्त करने के लिए विशेष ध्यान की आवश्यकता होती है:
माइक्रो patterning तकनीक प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत के विश्लेषण के लिए कई संभावनाएं प्रदान करता है है. सबसे पहले, स्थानीय, spatially हल प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत की मात्रा का ठहराव के साथ भी कमजोर या अप्रत्यक्ष रूप से बातचीत का पता लगाने झूठी सकारात्मक या नकारात्मक की एक उच्च संख्या देने के नुकसान के बिना संभव है. दूसरी बात यह शोधकर्ता जीवित कोशिकाओं के प्लाज्मा झिल्ली, जो 2 संकर स्क्रीन की तरह जैव रासायनिक दृष्टिकोण द्वारा हासिल करना मुश्किल है में प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत का विश्लेषण करने के लिए सक्षम बनाता है. तीसरा दृष्टिकोण चारा शिकार बातचीत है कि तापमान, विभिन्न प्रोटीन या अन्य अणुओं या बाद translational संशोधनों की उपस्थिति की तरह पर्यावरण परिवर्तन के द्वारा modulated हैं का पता लगाने के के लिए अनुमति देता है. इस प्रकार परख एक दिया जीवित कोशिकाओं के संदर्भ में बातचीत जोड़ी की स्क्रीनिंग modulators के लिए अनुमति देता है. इसके अलावा कब्जा ligand या monovalent ligands के उपयोग की सतह के घनत्व को कम करके आराम की स्थिति का विश्लेषण संभव हो जाता है. अंत में, यदि पर्याप्त स्कैनिंग प्लेटफार्मों का उपयोग किया जाता है, विश्लेषण कोशिकाओं की संख्या पर्याप्त उच्च करने के लिए दवा स्क्रीनिंग के लिए दवा कंपनियों के उच्च throughput की मांग (Ramm, 2005) मैच है.
The authors have nothing to disclose.
हम Quentina Beatty, Linz, आस्ट्रिया के विश्वविद्यालय, उसे तरह की मदद, Katharina Strub, जिनेवा, स्विट्जरलैंड के विश्वविद्यालय के लिए धन्यवाद, hCD71 GFP निर्माण, और डैनियल Legler, Konstanz, स्विट्जरलैंड के विश्वविद्यालय के लिए जीपीआई GFP के लिए करना चाहते हैं – DAF निर्माण. और ऑस्ट्रिया के विज्ञान और अनुसंधान के लिए संघीय मंत्रालय के जनरल ए.यू. परियोजना, यह काम ऑस्ट्रियाई विज्ञान कोष (परियोजना Y250-B03 FWF) द्वारा समर्थित किया गया था.