在小鼠胰腺β-细胞团的原位定量
Summary
以下协议概述了虚拟切片成像过程中，胰腺癌的夹层和随后所有GFP标记在整个胰腺β细胞的定量。
Abstract
跟踪在健康和疾病的特定细胞群的变化是生物医学研究的一个重要目标。监测胰腺β细胞增殖和胰岛生长的过程中是特别具有挑战性。我们已经开发出一种方法来捕获完整的胰腺β细胞的分布与荧光标记的β细胞ImageJ（/ rsb.info.nih.gov / IJ）编写的宏转基因小鼠。胰腺解剖和组织清算，作为一个虚拟切片，捕获整个胰腺后，GFP标记的β细胞的研究。分析包括定量β细胞总面积，胰岛数量和大小分布参考具体参数和每个胰岛β细胞小群的位置。可以绘制整个小岛分布在三个层面，从每个胰岛的大小和形状的分布信息，允许一个整体β细胞面积的变化一目了然的定量和定性的比较。
Protocol
第1部分：试样制备下解剖镜下放置鼠标，整个胰腺仍然附着与十二指肠和脾脏中删除，并放在一个预先称重的载玻片机关。取出沿侧切割结缔组织，它必然胰腺十二指肠。剪切和删除对胰腺的脾和多余的脂肪，直到胰腺是幻灯片上的完全隔离。 （胰腺脂肪是从胰腺组织的颜色稍深和Tanner的区别，其白色区分开来。） 将盖玻片（大盖玻璃50x75mm;标准盖玻片25x75mm）在胰腺，使其完…
Discussion
完整的胰腺中的胰岛细胞和β细胞集群的虚拟切片图像分析提供了一个大规模的看法，整个小岛分布。发展，随着时间的推移，总胰岛分布的变化，因此可以研究和比较。在我们的胰岛形成（1）分析表明了这样一个例子。在不同时间点（P1 – P21）的综合分析表明新生小鼠的胰腺，胰岛裂变形成。虽然β-细胞的增殖与小鼠的对数正态分布的概率密度函数从P1 – P10适合从P12开始，胰岛分布向左偏离距离…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
支持这项研究是由美国公众卫生服务补助DK – 081527，DK – 072473和DK – 20595芝加哥糖尿病研究和培训中心（动物模型核心）的大学，Kovler家庭基金会的礼物。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Forceps | Miltex | |||
| Scissors | F.S.T | 14001-13 | 01n2 | |
| Scissors | F.S.T | 14072-10 | 02s5 | |
| Large glass slide | Electron Microscopy Sciences | 71862-01 | 75x51x1.2mm | |
| Large cover glass | Ted Pella, Inc | 260462 | 50x75mm | |
| Glass Slide | Fisher Scientific | 12-550-15 | 25x75x1.0mm | |
| Cover glass | Fisher Scientific | 12-458-5M | 75x25mm | |
| Cover glass | Erie Scientific | 25mm circle | ||
| Fluorescent microscope | Olympus IX-81 | |||
| Dissection microscope | Olympus SZX12 | |||
| Stereo Investigator | MicroBrightField | |||
| MIP-GFP mice | Jackson Laboratory |
References
- Miller, K., Kim, A., Kilimnik, G., Moka, U., Jo, J., Periwal, V., Hara, M. Islet formation during the neonatal development in mice. PloS One. 4, E7739-E7739 (2009).
- Kilimnik, G., Kim, A., Jo, J., Miller, K., Hara, M. Quantification of pancreatic islet distribution in situ in mice. Am J Physiol Endocrinol Metab. 297, E1331-E1338 (2009).
- Hara, M., Wang, X., Kawamura, T., Bindokas, V. P., Dizon, R. F., Alcoser, S. Y., Magnuson, M. A., Bell, G. I. Transgenic mice with green fluorescent protein-labeled pancreatic beta -cells. Am J Physiol Endocrinol Metab. 284, E177-E183 (2003).
- Hara, M., Dizon, R. F., Glick, B. S., Lee, C. S., Kaestner, K. H., Piston, D. W., Bindokas, V. P. Imaging pancreatic beta-cells in the intact pancreas. Am J Physiol Endocrinol Metab. 290, E1041-E1047 (2006).
Tags
In Situ QuantificationPancreatic Beta-cell MassMiceSpecific Cell PopulationsHealth And DiseaseBiomedical ResearchMonitoringBeta-cell ProliferationIslet GrowthMethod DevelopmentFluorescence-tagged Beta-cellsImageJ MacroPancreatic DissectionVirtual SliceGFP-tagged Beta-cells ExaminationQuantificationTotal Beta-cell AreaIslet NumberSize DistributionSpecific Parameters And LocationsSmall Clusters Of Beta-cellsDistribution PlottingThree DimensionsInformation From Distribution AnalysisQuantitative ComparisonQualitative Comparison
Cite This Article
Kim, A., Kilimnik, G., Hara, M. In situ Quantification of Pancreatic Beta-cell Mass in Mice. J. Vis. Exp. (40), e1970, doi:10.3791/1970 (2010).