В месте Количественная поджелудочной железы бета-клеток у мышей массовой
Summary
Следующий протокол описывает процесс поджелудочной рассечение для виртуальных изображений ломтик, и последующего количественного всех GFP-меткой бета-клеток в поджелудочной железе все.
Abstract
Отслеживание изменений конкретных популяций клеток в норме и патологии является важной целью проведения биомедицинских исследований. Процесс мониторинга панкреатических бета-клеток островков и рост особенно сложным. Мы разработали метод захвата распределения бета-клеток в поджелудочной железе нетронутыми трансгенных мышей с флуоресцентными метками бета-клеток с макроса, написанного для ImageJ (rsb.info.nih.gov / ц /). После вскрытия поджелудочной железы и ткани очистки, всей поджелудочной железы захватывается в качестве виртуального ломтик, после чего GFP-меткой бета-клеток рассматриваются. Анализ включает в себя количественную оценку суммарной бета-клеток площадь, количество островок и распределение по размерам со ссылкой на конкретные параметры и места для каждого островка и для небольших кластеров бета-клеток. Все распределение островков могут быть построены в трех измерениях, а также информации от распространения на размер и форму каждого островка позволяет количественное и качественное сравнение изменений в общей бета-клеток области с первого взгляда.
Protocol
Discussion
Анализ виртуальных образов Кусочек островков и бета-клеток кластеров в неповрежденную поджелудочной железы обеспечивает крупномасштабных вид на весь распределения островков. События и изменения в общем распределении островок в течение долгого времени, таким образом, изучать и срав?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Работа выполнена при поддержке США Служба общественного здравоохранения Грант DK-081 527, DK-072 473 и DK-20595 в Чикагском университете диабета Научно-учебный центр (Core животных моделях), а также подарок от Фонда семьи Ковлер.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Forceps | Miltex | |||
| Scissors | F.S.T | 14001-13 | 01n2 | |
| Scissors | F.S.T | 14072-10 | 02s5 | |
| Large glass slide | Electron Microscopy Sciences | 71862-01 | 75x51x1.2mm | |
| Large cover glass | Ted Pella, Inc | 260462 | 50x75mm | |
| Glass Slide | Fisher Scientific | 12-550-15 | 25x75x1.0mm | |
| Cover glass | Fisher Scientific | 12-458-5M | 75x25mm | |
| Cover glass | Erie Scientific | 25mm circle | ||
| Fluorescent microscope | Olympus IX-81 | |||
| Dissection microscope | Olympus SZX12 | |||
| Stereo Investigator | MicroBrightField | |||
| MIP-GFP mice | Jackson Laboratory |
References
- Miller, K., Kim, A., Kilimnik, G., Moka, U., Jo, J., Periwal, V., Hara, M. Islet formation during the neonatal development in mice. PloS One. 4, E7739-E7739 (2009).
- Kilimnik, G., Kim, A., Jo, J., Miller, K., Hara, M. Quantification of pancreatic islet distribution in situ in mice. Am J Physiol Endocrinol Metab. 297, E1331-E1338 (2009).
- Hara, M., Wang, X., Kawamura, T., Bindokas, V. P., Dizon, R. F., Alcoser, S. Y., Magnuson, M. A., Bell, G. I. Transgenic mice with green fluorescent protein-labeled pancreatic beta -cells. Am J Physiol Endocrinol Metab. 284, E177-E183 (2003).
- Hara, M., Dizon, R. F., Glick, B. S., Lee, C. S., Kaestner, K. H., Piston, D. W., Bindokas, V. P. Imaging pancreatic beta-cells in the intact pancreas. Am J Physiol Endocrinol Metab. 290, E1041-E1047 (2006).
