货物装载到驱动蛋白供电分子梭
Summary
滑翔表面坚持kinesin的马达蛋白可以作为一个纳米级的运输系统的功能化微管组成的分子航天飞机。在这里，一个典型的航天飞机系统的组装描述。
Abstract
细胞进化复杂的分子机器，如驱动蛋白马达蛋白和微管丝，积极支持细胞内的货物运输。而动蛋白尾巴域结合各种货物，动蛋白的头域利用的化学能储存在ATP分子沿着微管晶格步骤。长的，僵硬的微管作为长距离的细胞内运输的轨道。
这些电机和长丝，也可以受雇于微型合成环境中，作为分子航天飞机1的组成部分。在经常使用的设计，马达驱动蛋白锚定通过跟踪它们的尾巴表面，载货元素，这些电机推进服务和功能化微管。这些航天飞机可装载货物，利用生物素链亲和素之间的强和选择性结合。 （生物素标记的微管蛋白，链霉亲和素和生物素的货物）关键部件均为市售。
大厦的经典倒活力测定2，分子航天飞机的建设是在这里详细说明。驱动蛋白马达蛋白被吸附到表面覆膜与酪蛋白，生物素标记的微管蛋白聚合微管，坚持动蛋白，随后与罗丹明标记的链霉涂层。 ATP的浓度保持在subsaturating浓度来实现微管滑行速度的最佳装货3。最后，生物素，荧光标记的纳米球是货物补充。纳米微粒的附着微管作为滑翔坚持到表面的微管和纳米球之间的碰撞的结果。
该协议可以很容易地修改，加载，如生物素化DNA，量子点 5或通过 4-6生物素化抗体的抗原种类繁多的各种货物。
Protocol
Discussion
稍作修改，该协议已经被成功地用于各种群体组装动蛋白，微管为基础的蠕动检测。在最终蠕动解决方案的10毫米数码地面电视服务可以被替换为0.5％β-巯基乙醇。标准解决方案（BRB80AF，KIN20和MT1000）2个多小时，不应该使用。含有紫杉醇，尤其是微管的任何解决方案，不应该被放置在冰上。过度暴露于紫外线激发光损伤的功能部件，结果：流动池，微管和驱动蛋白 8这种效应更为明显，如…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们负债累累乔纳森豪集团开发的基本协议，后来我们适应一个滑翔运动的检测，其。来自美国国家科学基金会资助DMR0645023的财务支持表示感谢。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Adenosine-5’-triphosphate (ATP) | Invitrogen | A1049 | ||
| Biotin tubulin | Cytoskeleton Inc. | T333 | ||
| Casein | Sigma-Aldrich | C-0376 | ||
| Catalase | Sigma-Aldrich | C-9322 | ||
| D-(+)-Glucose | Sigma-Aldrich | G-7528 | ||
| Dimethylsulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | D-8779 | ||
| Dithiotreitol (DTT) | Bio-Rad | 161-0610 | ||
| Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N′,N′-tetraacetic acid (EGTA) | Sigma-Aldrich | E-4378 | ||
| FluoSpheres Biotinylated microspheres, 40 nm, yellow-green fluorescent (505/515) | Invitrogen | F-8766 | ||
| Glucose oxidase | Sigma-Aldrich | G-7016 | ||
| Guanosine-5’-triphosphate (GTP) | Roche Diagnostic | 106399 | ||
| Magnesium Chloride (MgCl2) | Sigma-Aldrich | 63069 | ||
| Paclitaxel (Taxol) | Sigma-Aldrich | T1912 | ||
| 1,4-Piperazinediethanesulfonic acid, Piperazine-1,4-bis(2-ethanesulfonic acid), Piperazine-N,N′-bis(2-ethanesulfonic acid) (PIPES) | Sigma-Aldrich | P-6757 | ||
| Potassium hydroxide (KOH) | Sigma-Aldrich | P-6310 | ||
| Sodium hydroxide (NaOH) | Sigma-Aldrich | 480878 | ||
| Streptavidin Alexa Fluor 568 conjugate | Invitrogen | S11226 |
References
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