Aislamiento de células madre de tejidos blandos musculoesqueléticos
Summary
Aislar las células madre adultas de músculo esquelético tejidos blandos sobre la base de la velocidad de la adhesión de las células para matraz.
Abstract
Las células madre adultas han sido discutidos en lo que respecta a su aplicación en medicina regenerativa. Las células madre adultas han generado un gran entusiasmo para el tratamiento de los tejidos lesionados y enfermos debido a su impresionante capacidad de someterse a multi-linaje diferenciación de las células y su capacidad de auto-renovación. Más importante aún, estas cualidades han hecho ventajoso para su uso en terapias de células autólogas de trasplante. El protocolo actual se introduce a los lectores a la técnica preplate modificado en los tejidos blandos del aparato locomotor, por ejemplo, los tendones y los músculos, son un<sup> St</sup> Disociadas enzimáticamente y luego se colocan en frascos de colágeno recubiertas con un medio. El sobrenadante, que se compone de medio y las células restantes flotante, es de serie transferidos diariamente a nuevos frascos. Las células madre son los más lentos en cumplir con los frascos que se tarda generalmente 5-7 días (transferencias de serie o preplates). Mediante el uso de esta técnica, las células madre adultas presentes en estos tejidos pueden ser fácilmente recolectadas a través de bastante los procedimientos no invasivos.
Protocol
Discussion
Se ha reconocido que algunos tejidos adultos hay células madre múltiples. En los últimos años de estudio, las células madre se han detectado en los tejidos blandos musculoesqueléticos, incluyendo el músculo esquelético y el tendón. Este protocolo actual de los detalles de un procedimiento, conocido como la técnica preplate modificado, que ha sido utilizado con éxito en nuestro laboratorio para aislar las células madre adultas de los tendones y los músculos esqueléticos. Utilizando la técnica de preplate m…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores están muy agradecidos de la Sra. Haiying Pan y el Sr. Ian Bellayr por su ayuda técnica en el aislamiento de células de las películas actuales, y el Sr. Kyle Holden y el Sr. Jonathan Lucas, por su ayuda en la edición de diapositivas. Muchas gracias a la siguiente lista de personas que han estado involucrados con el desarrollo de las técnicas preplate modificado en los últimos años: los Dres. Burhan Gharaibeh, Cao Baohong, Bridget Deasy, Thomas R. Payne, Aiping Lu, Hairong Peng, Hideki Oshima, Bo Zeng, Xiaodong Mu, Kimimasa Tobita, Ron Jankowski, Makato Ikezawa. Estamos muy agradecidos por la asistencia técnica de James H. Cummins, Pruchnic Ryan, Feduska José, Rebecca C. Schugar, Pan y Haiying Tebbets Jessica. El autor también desea agradecer el apoyo financiero para este trabajo de la Asociación de Distrofia Muscular (MDA), los Institutos Nacionales de Salud (NIH), el Departamento de Defensa (DOD), el Hospital de Niños de Pittsburgh de UPMC, el Departamento de Cirugía Ortopédica y Traumatología, y la Universidad de Pittsburgh.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | #11995-073 | ||
| FBS | Invitrogen | #10437-028 | ||
| Heat-inactivated horse serum | Invitrogen | #26050-088 | ||
| Chick embryo extract | Accurate Chemical | #CE650T-10 | ||
| 100U ml penicillin/streptomycin | Invitrogen | #15140-122 | ||
| Dulbecco’s PBS | Invitrogen | #14190-250 | ||
| Hank’s Buffered Salt Solution | Invitrogen | #24020-117 | ||
| Collagenase type XI 0.2%(wt/vol) | Sigma-Aldrich | #C7657 | ||
| Dispase2.4U ml | Invitrogen | #17105-041 | ||
| Trypsin-EDTA0.5%(wt/vol) (10x;5g liter trypsin (1:250) | Invitrogen | #15400-054 | ||
| Collagen for coating flask : Type I collagen derived from calf skin 0.1 g liter | Sigma-Aldrich | #C-9791 | ||
| DMSO | Sigma | #D-2650 |
References
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