Isolera stamceller från Soft Muskuloskeletala vävnader
Summary
Isolera stamceller från rörelseorganens mjukdelar baserat på cellens anslutning hastighet till kolv.
Abstract
Adulta stamceller har länge diskuterats i avseende på deras tillämpning i regenerativ medicin. Adulta stamceller har genererat en hel del spänning för behandling av skadade och sjuka vävnader på grund av deras imponerande förmåga att genomgå flera härstamning celldifferentiering och deras egen förmåga att förnyas. Viktigast har dessa kvaliteter gjort dem fördelaktigt för att användas vid autolog cellterapi transplantation. Den nuvarande protokollet kommer att introducera läsaren till de ändrade preplate teknik där mjukdelar i rörelseapparaten, till exempel senor och muskler, är en<sup> St</sup> Enzymatiskt dissocierade och sedan placeras i kollagen belagda kolvar med medium. Supernatanten, som består av medelstora och resterande flytande celler, är seriellt överförs dagligen till nya kolvar. Stamcellerna den långsammaste att följa flaskor som vanligtvis tar 5-7 dagar (seriell överföring eller preplates). Genom att använda denna teknik, vuxna stamceller som finns i dessa vävnader lätt kan skördas genom tämligen icke-invasiva metoder.
Protocol
Discussion
Det har konstaterats att en del vuxna vävnader innehåller flera stamceller. Under senare års studier har stamceller upptäckts i den mjuka muskuloskeletala vävnader, inklusive skelettmuskulaturen och senor. Det nuvarande protokollet närmare ett förfarande, kallat den modifierade preplate teknik, som har framgångsrikt använts i vårt laboratorium för att isolera adulta stamceller från senor och skelettmuskulatur. Med hjälp av ändrade preplate teknik som beskrivs ovan cellerna kan delas upp i flera populatione…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Författarna är starkt uppskattar Ms Haiying Pan och Ian Bellayr för teknisk hjälp på cell isolering för den aktuella filmer och Mr Kyle Holden och Mr Jonathan Lucas för deras hjälp med bild redigering. Ett stort tack till följande lista med personer som varit involverade i utvecklingen av den modifierade preplate tekniker under de senaste åren: Dr. Burhan Gharaibeh, Baohong Cao, DEASY Bridget, Thomas R. Payne, Aiping Lu, Hairong Peng, Hideki Oshima, Bo Zeng, Xiaodong Mu, Kimimasa Tobita, Ron Jankowski, Makato Ikezawa. Vi är tacksamma för tekniskt bistånd från James H. Cummins, Ryan Pruchnic, Joseph Feduska, Rebecca C. Schugar, Haiying Pan och Jessica Tebbets. Författaren vill också erkänna ekonomiskt stöd för detta arbete från muskeldystrofi Association (MDA), National Institutes of Health (NIH), Department of Defense (DOD), Barnens sjukhus i Pittsburgh i UPMC, Institutionen för Ortopedisk kirurgi, och University of Pittsburgh.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | #11995-073 | ||
| FBS | Invitrogen | #10437-028 | ||
| Heat-inactivated horse serum | Invitrogen | #26050-088 | ||
| Chick embryo extract | Accurate Chemical | #CE650T-10 | ||
| 100U ml penicillin/streptomycin | Invitrogen | #15140-122 | ||
| Dulbecco’s PBS | Invitrogen | #14190-250 | ||
| Hank’s Buffered Salt Solution | Invitrogen | #24020-117 | ||
| Collagenase type XI 0.2%(wt/vol) | Sigma-Aldrich | #C7657 | ||
| Dispase2.4U ml | Invitrogen | #17105-041 | ||
| Trypsin-EDTA0.5%(wt/vol) (10x;5g liter trypsin (1:250) | Invitrogen | #15400-054 | ||
| Collagen for coating flask : Type I collagen derived from calf skin 0.1 g liter | Sigma-Aldrich | #C-9791 | ||
| DMSO | Sigma | #D-2650 |
References
- Gharaibeh, B. Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique. Nat Protoc. 3, 1501-1509 (2008).
- Qu-Petersen, Z. Identification of a novel population of muscle stem cells in mice: potential for muscle regeneration. J Cell Biol. 157, 851-864 (2002).
- Li, Y. &. a. m. p. ;. a. m. p., Huard, J. Differentiation of muscle-derived cells into myofibroblasts in injured skeletal muscle. Am J Pathol. 161, 895-907 (2002).
- Watt, D. J., Lambert, K., Morgan, J. E., Partridge, T. A. &. a. m. p. ;. a. m. p., Sloper, J. C. Incorporation of donor muscle precursor cells into an area of muscle regeneration in the host mouse. J Neurol Sci. 57, 319-331 (1982).
- Lu, A. Isolation of myogenic progenitor populations from Pax7-deficient skeletal muscle based on adhesion characteristics. Gene Ther. 15, 1116-1125 (2008).
- Lee, J. Y. Clonal isolation of muscle-derived cells capable of enhancing muscle regeneration and bone healing. J Cell Biol. 150, 1085-1100 (2000).
- Cao, B. The role of receptors in the maturation-dependent adenoviral transduction of myofibers. Gene Ther. 8, 627-637 (2001).
- Cao, B. Muscle stem cells differentiate into haematopoietic lineages but retain myogenic potential. Nat Cell Biol. 5, 640-646 (2003).
- Huard, J. Regenerative medicine based on muscle stem cells. J Musculoskelet Neuronal Interact. 8, (2008).
- Gates, C. B., Karthikeyan, T., Fu, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Huard, J. Regenerative medicine for the musculoskeletal system based on muscle-derived stem cells. J Am Acad Orthop Surg. 16, 68-76 (2008).
