Zebra Balığı Kaçınma ve Thigmotaxis Tahlil: Aversive Görsel Uyarana Yanıt Olarak Larva Davranışını İncelemek için Yüksek Verimli Bir Yöntem

Overview

Video, zebra balığı larvalarının kaçınma ve thigmotaxis testini açıklar. Video, görsel aversif uyarana yanıt olarak zebra balığı larvalarının davranışını inceler.

Protocol

1. Görüntü Yakalama

1. Plakaların her şeridine 20'ye kadar larva yerlenebilir. Tipik olarak kulvar başına 5 larva, yüzme hızının en doğru şekilde izlenmesini kolaylaştırmak ve deney başına gerekli olan larva sayısını azaltmak için kullanılır. Şeritler, deneye bağlı olarak ilaçlı veya toksik maddesiz yumurta suyu ile doldurulabilir. Bununla birlikte, şeritler görüntüleme dolaplarına yerleştirilecek kadar doldurulmamalıdır; bu taşma önleyecektir. Tutarlılık için larvalar, agarose kalıplarına yerleştirildikten ve dizüstü bilgisayar ekranının üstüne yerleştirildikten sonra on dakikalık bir iklimlendirme süresine sahip olmalıdır. Larvaları Petri kabından agarose şeridine verimli bir şekilde taşımak larva stresini azaltmaya yardımcı olacaktır. Larvalar sığ tanklarda veya Petri yemeklerinde barındırıldığında bu en kolayıdır.
2. Görüntüleme kabinleri arasında hızlandırılmış fotoğrafçılık için kullanılan bir Canon dijital kamera ve bir dizüstü bilgisayar bulunur. Kamera kabinin üstüne yerleştirilecek ve 15,6 inç ekranlı bir dizüstü bilgisayarın ekrana bakacak şekilde yerleştirilmesi gereken kabinin altına doğru hedeflenmelidir (Şekil 1). Dört plaka doğrudan dizüstü bilgisayar ekranının üzerine elle yerleştirilmelidir. Şu anda şeritler yumurta suyu veya kimyasal işlem ile kaplanabilir, böylece şeridin üst kısmıyla seviye atlayabilir (görüntülerdeki şeritlerin kenarlarındaki gölgeleri ortadan kaldırmak için).
3. PowerPoint sunusu larvalar için aversive uyaran olarak kullanılır. Geçmişte hareket eden kırmızı toplar zebra balığı larvalarına 6 veya 12 çok kuyulu plakada gösterilmiştir. Geçerli PowerPoint, 15 dakika boyunca boş bir beyaz arka planla başlar, ardından plakanın üst yarısında hareket eden kırmızı bir çubuğun 15 dakikası(Şekil 2). Larvaların aşırı ısınmasını ortadan kaldırmak için, 28 ° C'nin üzerine çıkmayan bir ekran sıcaklığına sahip bir dizüstü bilgisayar satın almak en iyisidir. Agarose şeritlerindeki sıvının buharlaşmasını önlemek için maksimum görüntüleme süresi bir saatin altında tutulmalıdır.
4. Dijital kamera, deney başına toplam 300 görüntü için her 6 saniyede bir fotoğraf çekerek hızlandırılmış fotoğrafçılık için programlanmalıdır. Bununla birlikte, sıklık ve uzunluk deneye ve davranışsal nicelemeye bağlı olarak ayarlanabilir. Geçmişte her görüntü arasında daha uzun aralıklarla genişletilmiş görüntüleme süreleri kullanılmıştır. Kamera, video hızında görüntüleme için daha düşük bir çözünürlüğe ayarlanabilir (saniyede 30 kare). Alt çözünürlük kayıtları tek bir çoklu yükseklik plakasıyla sınırlasa da, video kayıtları hızlı yüzme etkinliklerini görüntülemek için uygundur.

Representative Results

Şekil 1. Görüntüleme Dolapları. Görüntüleme kabinleri laboratuvarımızda özel olarak inşa edilmiş ve yüksek verimli davranış analizleri için kullanılmıştır. Bir dizüstü bilgisayarın ekranının üzerine yerleştirilen çok katmanlı plakalarda larvaların zaman atlamalı görüntülerini toplamak için kabinin aşağı bakan üst kısmına 15 megapiksel dijital kamera takıldı. Plakalar ve ekran arasında, toplanan görüntülerdeki moiré desenlerini önlemek için kullanılan plastik bir difüzör vardır.

Şekil 2. Boş arka plan ve PowerPoint aversive uyaran. Bu, zebra balığı larvalarındaki davranış değişikliklerini uyandırmak için kullanılan mevcut PowerPoint'tir. A) boş arka plan ve B) hareketli kırmızı çubuk arasında sağlam davranışsal farklılıklar sağlar.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Imaging Cabinets	WoodCraft Towers
Agarose	Fisher	BP1356-100
Digital camera	Canon EOS	Rebel T1i
Laptops	Acer Aspire		Any is good as long as it has a 15.6 in. LCD screen with 1366 x 768 pixel resolution and a brightness of 220 cd/m2.
One well plates	Fisher	12-565-493
PowerPoint 2010	Microsoft
Plastic diffuser	Pendaflex	52345