Зебрафиш Избегание и Thigmotaxis анализ: высокая пропускная способность метод для изучения larval поведение в ответ на аверсивный визуальный стимул

Overview

Видео описывает избегание и thigmotaxis анализ личинок зебры. Видео исследует поведение личинок зебры в ответ на визуальный аверсивный стимул.

Protocol

1. Захват изображения

1. В каждой полосе пластин может быть размещено до 20 личинок. Обычно 5 личинок на полосу используются для облегчения наиболее точного отслеживания скорости плавания и сокращения количества личинок, которые необходимы для эксперимента. Полосы могут быть заполнены яичной водой с или без фармацевтических препаратов или токсикантов в зависимости от эксперимента. Тем не менее, полосы движения не должны заполняться до тех пор, пока они не будут помещены в шкафы для визуализации; это предотвратит переполнение. Для консистенции личинки должны иметь период акклиматизации через десять минут после того, как они помещаются в формы агарозы и расположены поверх экрана ноутбука. Эффективное перемещение личинок из чашки Петри в агарозный переулок поможет уменьшить стресс личинок. Это проще всего, когда личинки размещаются в мелководных резервуарах или чашках Петри.
2. Кабинеты изображений включают цифровую камеру Canon, используемую для замедленной съемки, и ноутбук. Камера должна быть помещена в верхней части шкафа и направлены в сторону нижней части шкафа, где 15,6 дюймовый экран ноутбука должны быть размещены с экраном вверх(рисунок 1). Четыре пластины должны быть расположены вручную прямо на верхней части экрана ноутбука. В это время полосы могут быть увенчаны с яичной водой или химической обработки, так что это уровень с верхней части полосы движения (для устранения теней по краям полос на изображениях).
3. Презентация PowerPoint используется в качестве аверсивного стимула для личинок. В прошлом движущиеся красные шары были показаны личинки зебры в 6 или 12 многофункциональных пластин. Текущий PowerPoint начинается с пустой белый фон в течение 15 минут, а затем 15 мин движущихся красный бар на верхней половине пластины (Рисунок 2). Для того, чтобы исключить перегрев личинок, лучше всего приобрести ноутбук с температурой экрана, которая не опускается выше 28 градусов по Цельсию. Чтобы избежать испарения жидкости в полосах агарозы, максимальное время визуализации должно быть ниже одного часа.
4. Цифровая камера должна быть запрограммирована для замедленной съемки, фотографируя каждые 6 секунд в общей сложности 300 изображений за эксперимент. Тем не менее, частота и длина могут быть скорректированы в зависимости от эксперимента и поведенческой количественной оценки. В прошлом расширенное время изображения использовалось с использованием более длительных интервалов между каждым изображением. Камера может быть установлена с более низким разрешением для визуализации на скорости видео (30 кадров в секунду). В то время как нижнее разрешение ограничивает записи одной многоухонной пластиной, видеозаписи подходят для визуализации событий быстрого плавания.

Representative Results

Рисунок 1. Кабинеты изображений. Шкафы для визуализации были специально построены в нашей лаборатории и использовались для высокой пропускной способности поведенческих анализов. 15-мегапиксельная цифровая камера была прикреплена к верхней части шкафа, обращенной вниз, чтобы собрать покадровые изображения личинок в многолановые пластины, размещенные на верхней части экрана ноутбука. Между пластинами и экраном есть пластиковый диффузор, который используется для предотвращения муара моделей в изображениях, собранных.

Рисунок 2. Пустой фон и PowerPoint обратный стимул. Это текущий PowerPoint, который используется, чтобы вызвать поведенческие изменения в личинках зебры. Он обеспечивает надежные поведенческие различия между A) пустой фон и B) движущихся красный бар.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Imaging Cabinets	WoodCraft Towers
Agarose	Fisher	BP1356-100
Digital camera	Canon EOS	Rebel T1i
Laptops	Acer Aspire		Any is good as long as it has a 15.6 in. LCD screen with 1366 x 768 pixel resolution and a brightness of 220 cd/m2.
One well plates	Fisher	12-565-493
PowerPoint 2010	Microsoft
Plastic diffuser	Pendaflex	52345