Transduction pour étiqueter les cellules tumorales PDX : Introduction du lentivirus exprimant le marqueur fluorescent dans la cellule tumorale in vitro
Published: April 30, 2023
Abstract
Source : Hanna, C., et autres. Étiquetage des xénogreffes dérivées du cancer du sein avec des reporters traçables pour la croissance tumorale et les études de métastase. J. Vis. Exp. (2016).
La vidéo suivante décrit une technique de transduction pour étiqueter (xénogreffes dérivées du patient) les cellules tumorales PDX, qui est utilisée pour introduire le lentivirus exprimant des journalistes de protéine vert-fluorescent et de luciferase dans la cellule tumorale in vitro.
Protocol
1. Transduction des cellules tumorales dérivées du PDX Centrifugeuse dissocié cellules tumorales à 300 g x 5 min et resuspendre dans 2 ml de médias mammosphère. Comptez les cellules viables à l’aide de l’exclusion bleue trypan (Resuspend cellules digérées dans 5 ml tampon de lavage et compter les cellules viables et non viables en utilisant trypan exclusion bleue. En bref, mélanger 50 μl de cellules et 50 μl de bleu trypan et compter trypan-bleu à l’exclusion des cellules à l’aide d’un h…
Representative Results
Figure 1 : Suivi de l’efficacité de la transduction dans les cellules PDX dissociées. A) Cellules dissociées PDX enrichies pour les cellules épithéliales humaines (épuisement Lin+) 24 heures après transduction avec des particules lentivirales pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro. B) Cellules dissociées pdx d’une expérience distincte, sans enrichissement épithélial de cellules, 72 heu…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 (1:1) | Hyclone | SH30023.01 | |
| bFGF | BD Biosciences | 354060 | |
| EGF | BD Biosciences | 354001 | |
| Heparin | Sigma | H4784 | |
| B27 | Gibco/Thermo Fisher | 17504-44 | |
| Anti-fungi-antibiotics | Hyclone | SV30010 | |
| HBSS Red Ca2+/Mg2+ free | Hyclone | SH30031.02 | |
| Hepes | |||
| Cultrex | Cultrex | 3433-005-01 | Basement Matrix Extract (BME) |
| 30 °C shaker | NewBrunswick Scientific CO. INC | Series 25 Incubator Shaker |
Cite This Article
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).