Visualizzazione dei nervi larvali segmentale in 3 Rd Instar Drosophila I preparativi larvali
Summary
Larve di Drosophila melanogaster fornire un sistema modello ideale per studiare i meccanismi di trasporto assonale in nervi larvale segmentale. Utilizzando questa procedura, 3 ° larve instar portatori di mutazioni varie può essere paragonato a larve wild-type.
Abstract
Drosophila melanogaster sta emergendo come un potente sistema modello per studiare lo sviluppo e la funzione del sistema nervoso, in particolare a causa della sua genetica e conveniente genoma completamente sequenziato. Inoltre, il sistema nervoso larvale è un sistema modello ideale per studiare i meccanismi del trasporto assonale, come i nervi larvale segmentale contenere fasci di assoni con i loro corpi cellulari situato all'interno del cervello e le loro terminazioni nervose finale lungo la lunghezza del corpo. Qui si descrive la procedura per la visualizzazione di proteine delle vescicole sinaptiche all'interno larvale nervi segmentale. Se fatto correttamente, tutte le componenti del sistema nervoso, con relativi tessuti come i muscoli e NMJs, rimane intatto, integro e pronto per essere visualizzato. 3 ° larve instar portatori di mutazioni diverse sono sezionati, fisso, incubate con anticorpi delle vescicole sinaptiche, visualizzati e confrontati con le larve wild-type. Questa procedura può essere adattata per diversi anticorpi diversi sinaptica o neuronale e cambiamenti nella distribuzione di una varietà di proteine può essere facilmente osservata entro larvale nervi segmentale.
Protocol
Discussion
I nervi larvale Drosophila segmentale sono un potente sistema per lo studio dei meccanismi di trasporto assonale. Se il 3 ° instar dissezione larvale viene eseguita correttamente, tutte le componenti del sistema nervoso centrale, PNS, e tessuti associati, come i muscoli e NMJs, possono essere esaminate all'interno di una singola larva. Abbiamo adattato questo protocollo da quella pubblicata da Hurd e Saxton (1996). Questo protocollo può essere adattato anche a test altri anticorpi neuronali, ma…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG è sostenuto da fondi del State University di New York a Buffalo e da John R. Oishei Foundation.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools, Inc. | 11252-20 | ||
| Minutien Pins, Stainless Steel | Fine Science Tools, Inc. | 26002-10 | ||
| Mcpherson-Vannas Straight Blade 8cm Scissors | Fisher Scientific | 50822236 | ||
| Vectashield, Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 | ||
| Sylgard 184 Silicone elastomer | Dow Corning Corporation | 4026148 | ||
| formaldehyde, 16% | Electron Microscopy Sciences | 15710 | ||
| dCSP3 | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 |
References
- Gunawardena, S., Goldstein, L. Disruption of Axonal Transport and Neuronal Viability by Amyoid Precursor Protein Mutations in Drosophila. Neuron. 32 (2), 389-401 (2001).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40 (1), 1-2 (2003).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. Genetics. 144 (3), 1075-1085 (1996).
- Zinsmaier, K. E., Eberle, K. K., Buchner, E., Walter, N., Benzer, S. Paralysis and early death in cysteine string protein mutants of Drosophila. Science. 263, 977-980 (1994).
