Fabbricazione di micro-tessuti utilizzando i moduli di Collagene Gel cellule contenenti
Summary
Creazione di micro-tessuti con gel di collagene cilindriche, chiamati moduli, che contengono cellule embedded e la cui superficie è rivestita con le cellule endoteliali.
Abstract
Questo protocollo descrive la fabbricazione di un tipo di micro-tessuti chiamate moduli. L'approccio modulo genera uniforme, scalabile e tessuti vascolarizzati. I moduli possono essere fatte di collagene così come altri materiali gelable o reticolabile. Sono circa 2 mm di lunghezza e 0,7 mm di diametro sulla fabbricazione, ma ridursi in dimensione con le cellule incorporato o quando i moduli sono rivestite di cellule endoteliali. I moduli singolarmente sono abbastanza piccoli che le celle sono incorporate nel limitare la diffusione di ossigeno e altre sostanze nutritive, ma i moduli possono essere imballate insieme per formare tessuti che sono più grandi perfusable. Questi tessuti sono modulari in costruzione a causa diversi tipi di cellule possono essere incorporati in o rivestiti sui moduli prima di essere imballate insieme per formare tessuti complessi. Ci sono tre passi principali per rendere i moduli: (1) neutralizzare il collagene e l'incorporamento di cellule in esso, (2) gelificazione il collagene nel tubo e tagliare i moduli e (3) rivestimento dei moduli con le cellule endoteliali.
Protocol
Discussion
Abbiamo fabbricato diversi diversi micro-tessuti con moduli integrati con diversi tipi di cellule 1-11. Abbiamo incorporato con successo cardiomiociti primari, isolotti, le cellule staminali adipose e cellule stromali mesenchimali così come diverse linee cellulari tra cui HepG2, NIH 3T3 e clonare 9 cellule del fegato. Abbiamo ricoperto i moduli con vari tipi di cellule endoteliali, comprese le cellule endoteliali aortiche ratto, cellule endoteliali della vena ombelicale e le cellule endoteliali microvascolar…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Intramedic tubing PE60 | Becton Dickson | 427416 | Different diameter of tubing can be used to change the diameter of the modules | |
| Phosphate-buffered saline (PBS) | Gibco | 20012-027 | ||
| Trypsin-EDTA | Gibco | 25200-072 | ||
| Purcol acidificed collagen, 3 mg/mL | Cedarlane | 5005-B | ||
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761 | ||
| 20G needle | Becton Dickson | 305175 | Diameter of the needle needs to be similar to the diameter of the tubing | |
| 3 mL syringe | BD Biosciences | 309585 | ||
| 15 mL tube | BD Biosciences | 352096 | ||
| 50 mL tube | BD Biosciences | 352070 | ||
| Convertors Self-Seal Pouch 7 1/2” x 13” | Cardinal Health | 92713 | ||
| 10 ml Wide Tip serological pipet | BD Falcon | 357504 | ||
| 10 ml serological pipet | BD Falcon | 357551 | ||
| 5 ml serological pipet | BD Falcon | 357543 |
References
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