वयस्क से Oenocytes के विच्छेदन ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em
Summary
कीड़ों में, oenocytes cuticular हाइड्रोकार्बन यौगिकों का उत्पादन. इन यौगिकों desiccation के खिलाफ की रक्षा और रासायनिक संचार की सुविधा. यहाँ हम एक विच्छेदन के लिए वयस्क से oenocytes अलग तकनीक का इस्तेमाल का प्रदर्शन<em> ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em> उदाहरण देकर स्पष्ट करने के लिए, और कैसे इस तैयारी हाइड्रोकार्बन संश्लेषण में शामिल जीनों का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जा सकता है.
Abstract
में<em> ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em> अन्य कीड़ों के रूप में, छल्ली की बाहरी सतह पर एक मोमी परत, हाइड्रोकार्बन यौगिकों के मुख्य रूप से बना, desiccation और अन्य पर्यावरणीय चुनौतियों के खिलाफ संरक्षण प्रदान करता है. इन cuticular हाइड्रोकार्बन के कई यौगिकों (सीएचसी) भी semiochemical संकेतों के रूप में कार्य है, और इस तरह के रूप में एक ही प्रजाति के सदस्यों के बीच pheromonal संचार मध्यस्थता, या विभिन्न प्रजातियों, और प्रभाव व्यवहार के बीच कुछ उदाहरणों में. विशेषज्ञता oenocytes के रूप में संदर्भित कक्षों सीएचसी संश्लेषण के लिए प्राथमिक साइट के रूप में माना जाता है. हालांकि, अपेक्षाकृत छोटे biosynthetic, परिवहन, और बयान रास्ते सीएचसी उत्पादन में योगदान करने के नियमन में oenocytes की भागीदारी के बारे में जाना जाता है. महत्वपूर्ण भूमिका है कि सीएचसी कीट जीव विज्ञान के रासायनिक संचार, desiccation प्रतिरोध, और प्रतिरक्षा सहित कई पहलुओं में खेलने को देखते हुए, यह सीएचसी उत्पादन के इन विशेष कोशिकाओं के भीतर आणविक और आनुवंशिक विनियमन का एक बड़ा समझ हासिल करने के लिए महत्वपूर्ण है. वयस्क oenocytes<em> डी. मेलानोगास्टर</em> पेट आवरण के भीतर स्थित हैं, और metamerically रिबन की तरह प्रत्येक पेट खंड के भीतर cuticular सतह के साथ radiating समूहों में arrayed हैं. इस वीडियो लेख में हम एक विच्छेदन वयस्क से oenocytes की तैयारी के लिए तकनीक का इस्तेमाल किया प्रदर्शन<em> डी. मेलानोगास्टर</em>. विशेष रूप से, हम एक विस्तृत कदम दर कदम का प्रदर्शन प्रदान करते हैं (1) पट्टिका एक वयस्क कैसे तैयार करने के लिए<em> ड्रोसोफिला</emपेट>, (2) oenocytes कैसे पहचान करने के लिए और उन्हें अन्य ऊतकों से विचार है, और (3) पेट आवरण से बरकरार oenocyte समूहों कैसे को दूर करने के लिए. कैसे इस तैयारी हाइड्रोकार्बन संश्लेषण में शामिल जीनों की अभिव्यक्ति की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है की एक संक्षिप्त प्रयोगात्मक चित्रण शामिल है. dissected तैयारी का प्रदर्शन इस के साथ साथ वयस्क फल मक्खी में oenocyte समारोह का विस्तृत आणविक और आनुवांशिक विश्लेषण के लिए अनुमति देगा.
Protocol
Discussion
इस वीडियो लेख में हम वयस्क से oenocytes की तैयारी के लिए एक विस्तृत विच्छेदन प्रोटोकॉल वर्तमान डी. आणविक विश्लेषण के लिए एक उपयुक्त तरीके से मेलानोगास्टर . 2 कहीं एक संक्षिप्त विच्छेदन विधि का पाठ ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम उसकी सहायता के लिए इस वीडियो लेख के फिल्मांकन में Amsale belay धन्यवाद देना चाहूंगा. यह काम CIHR, NSERC और JDL के लिए सीआरसी अनुदान द्वारा वित्त पोषित किया गया था.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard | Dow Corning | |||
| Tungsten Wire | Ted Pella, Inc. | 27-11 | 0.005”/20’ | |
| Forceps | Dumont | 11252-30 | #5 | |
| Shields and Sang M3 Insect Medium | Sigma | S3652 | ||
| RNeasy Micro Kit | Qiagen | 74004 | ||
| qScript cDNA Synthesis Kit | Quanta Biosciences | 95047-100 | ||
| Monoject Hypodermic Needle | Harvard Apparatus | 722289 | 20G1 with aluminum hub |
References
- Wielowiejski, H. Ueber das blutgewebe der insekten. Zeit. Wiss. Zool. 43, 512-536 .
- Krupp, J. J., Kent, C., Billeter, J. C., Azanchi, R., So, A. K., Schonfeld, J. A., Smith, B. P., Lucas, C., Levine, J. D. Social experience modifies pheromone expression and mating behavior in male Drosophila melanogaster. Curr. Biol. 18, 1373-1383 (2008).
- Locke, M. Surface membranes, Golgi complexes, and vacuolar systems. Annu. Rev. Entomol. 48, 1-27 (2003).
- Billeter, J. C., Atallah, J., Krupp, J. J., Millar, J. G., Levine, J. D. Specialized cells tag sexual and species identity in Drosophila melanogaster. Nature. 461, 987-991 (2009).
- Gould, A. P., Elstob, P. R., Brodu, V. Insect oenocytes: a model system for studying cell-fate specification by Hox genes. J. Anat. 199, 25-33 (2001).
- Lawrence, P. A., Johnston, P. Cell lineage of the Drosophila abdomen: the epidermis, oenocytes and ventral muscles. J. Embryol. Exp. Morphol. 72, 197-208 (1982).
- Johnson, M. B., Butterworth, F. M. Maturation and aging of adult fat body and oenocytes in Drosophila as revealed by light microscopic morphometry. J. Morphol. 184, 51-59 (1985).
- Gutierrez, E., Wiggins, D., Fielding, B., Gould, A. P. Specialized hepatocyte-like cells regulate Drosophila lipid metabolism. Nature. 445, 275-280 (2007).
- Marcillac, F., Bousquet, F., Alabouvette, J., Savarit, F., Ferveur, J. F. A mutation with major effects on Drosophila melanogaster sex pheromones. Genetics. 171, 1617-1628 (2005).
- Chertemps, T., Duportets, L., Labeur, C., Ueyama, M., Wicker-Thomas, C. A female-specific desaturase gene responsible for diene hydrocarbon biosynthesis and courtship behaviour in Drosophila melanogaster. Insect Mol. Biol. 15, 465-473 (2006).
- Legendre, A., Miao, X. X., Da Lage, J. L., Wicker-Thomas, C. Evolution of a desaturase involved in female pheromonal cuticular hydrocarbon biosynthesis and courtship behavior in Drosophila. Insect. Biochem. Mol. Biol. 38, 244-255 (2008).
- Shirangi, T. R., Dufour, H. D., Williams, T. M., Carroll, S. B. Rapid evolution of sex pheromone-producing enzyme expression in Drosophila. PLoS Biol. 7, e1000168-e1000168 (2009).
