Препарирование Oenocytes от взрослых Дрозофилы</em
Summary
У насекомых, oenocytes производить кутикулярных углеводородных соединений. Эти соединения защищают от высыхания и способствовать химической связи. Здесь мы показываем, рассечение техника, используемая для изоляции от взрослых oenocytes<em> Дрозофилы</em>, И показать, как этот препарат может быть использован для исследования генов, участвующих в синтеза углеводородов.
Abstract
В<em> Дрозофилы</em>, Как и в других насекомых, восковой слой на внешней поверхности кутикулы, состоит преимущественно из углеводородных соединений, обеспечивает защиту от высыхания и других экологических проблем. Некоторые из этих кутикулярных углеводородных (ХГС) соединений также функционировать как semiochemical сигналов, и в этом качестве посредника феромонов связи между членами одного и того же вида, или в некоторых случаях между различными видами, и влиять на поведение. Специализированные клетки называют oenocytes рассматриваются в качестве основной площадки для синтеза ХГС. Тем не менее, относительно мало известно об участии oenocytes в регуляции биосинтеза, транспорта и осаждения путей способствует выход ХГС. Учитывая значительную роль, которую играют в CHCs некоторые аспекты биологии насекомых, в том числе химические связи, высыхание сопротивление, и иммунитет, важно, чтобы получить более глубокое понимание молекулярных и генетических регулировании производства ХГС в этих специализированных клеток. Взрослый oenocytes из<em> D. MELANOGASTER</em> Находятся в брюшной кожного покрова, и метамерно одетые в ленточных кластеров излучающих вдоль внутренней кутикулярной поверхности каждого сегмента брюшка. В этом видео статье мы демонстрируем рассечение техника, используемая для подготовки oenocytes от взрослых<em> D. MELANOGASTER</em>. В частности, мы предоставляем подробные шаг за шагом демонстрации (1), как готовить филе взрослых<em> Drosophila</em> Живота, (2) как определить oenocytes и различать их от других тканей, и (3), как удалить нетронутыми oenocyte кластеров из брюшной оболочкой. Краткие экспериментальные иллюстрации того, как этот препарат может быть использован для изучения экспрессии генов, вовлеченных в синтез углеводородных включен в стоимость. Расчлененный подготовки продемонстрировали здесь позволит подробная молекулярно-генетический анализ oenocyte функции во взрослой плодовой мухи.
Protocol
Discussion
В этом видео статье мы представляем подробный протокол вскрытия для подготовки oenocytes от взрослых D. MELANOGASTER в порядке, подходящем для молекулярного анализа. Сокращенные текстовые счет вскрытия метод был описан в другом месте 2, и в результате oenocyte Препарат был продемонстриров?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы хотели бы поблагодарить Amsale страховки за ее помощь в съемках этого видео статьи. Эта работа финансировалась CIHR, NSERC и КПР гранты ЛЗЕ.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard | Dow Corning | |||
| Tungsten Wire | Ted Pella, Inc. | 27-11 | 0.005”/20’ | |
| Forceps | Dumont | 11252-30 | #5 | |
| Shields and Sang M3 Insect Medium | Sigma | S3652 | ||
| RNeasy Micro Kit | Qiagen | 74004 | ||
| qScript cDNA Synthesis Kit | Quanta Biosciences | 95047-100 | ||
| Monoject Hypodermic Needle | Harvard Apparatus | 722289 | 20G1 with aluminum hub |
References
- Wielowiejski, H. Ueber das blutgewebe der insekten. Zeit. Wiss. Zool. 43, 512-536 .
- Krupp, J. J., Kent, C., Billeter, J. C., Azanchi, R., So, A. K., Schonfeld, J. A., Smith, B. P., Lucas, C., Levine, J. D. Social experience modifies pheromone expression and mating behavior in male Drosophila melanogaster. Curr. Biol. 18, 1373-1383 (2008).
- Locke, M. Surface membranes, Golgi complexes, and vacuolar systems. Annu. Rev. Entomol. 48, 1-27 (2003).
- Billeter, J. C., Atallah, J., Krupp, J. J., Millar, J. G., Levine, J. D. Specialized cells tag sexual and species identity in Drosophila melanogaster. Nature. 461, 987-991 (2009).
- Gould, A. P., Elstob, P. R., Brodu, V. Insect oenocytes: a model system for studying cell-fate specification by Hox genes. J. Anat. 199, 25-33 (2001).
- Lawrence, P. A., Johnston, P. Cell lineage of the Drosophila abdomen: the epidermis, oenocytes and ventral muscles. J. Embryol. Exp. Morphol. 72, 197-208 (1982).
- Johnson, M. B., Butterworth, F. M. Maturation and aging of adult fat body and oenocytes in Drosophila as revealed by light microscopic morphometry. J. Morphol. 184, 51-59 (1985).
- Gutierrez, E., Wiggins, D., Fielding, B., Gould, A. P. Specialized hepatocyte-like cells regulate Drosophila lipid metabolism. Nature. 445, 275-280 (2007).
- Marcillac, F., Bousquet, F., Alabouvette, J., Savarit, F., Ferveur, J. F. A mutation with major effects on Drosophila melanogaster sex pheromones. Genetics. 171, 1617-1628 (2005).
- Chertemps, T., Duportets, L., Labeur, C., Ueyama, M., Wicker-Thomas, C. A female-specific desaturase gene responsible for diene hydrocarbon biosynthesis and courtship behaviour in Drosophila melanogaster. Insect Mol. Biol. 15, 465-473 (2006).
- Legendre, A., Miao, X. X., Da Lage, J. L., Wicker-Thomas, C. Evolution of a desaturase involved in female pheromonal cuticular hydrocarbon biosynthesis and courtship behavior in Drosophila. Insect. Biochem. Mol. Biol. 38, 244-255 (2008).
- Shirangi, T. R., Dufour, H. D., Williams, T. M., Carroll, S. B. Rapid evolution of sex pheromone-producing enzyme expression in Drosophila. PLoS Biol. 7, e1000168-e1000168 (2009).
