Dissekering av Oenocytes från Vuxen Drosophila melanogaster</em
Summary
I insekter, oenocytes producera cuticular kolväteföreningar. Dessa föreningar skyddar mot uttorkning och underlätta kemisk kommunikation. Här visar vi en dissektion teknik som används för att isolera oenocytes från vuxna<em> Drosophila melanogaster</em>, Och illustrerar hur denna förberedelse kan utnyttjas för att studera gener involverade i kolväten syntes.
Abstract
I<em> Drosophila melanogaster</em>, Liksom i andra insekter, ger en vaxartad lager på utsidan av nagelband, bestående främst av kolväteföreningar, skydd mot uttorkning och andra miljöutmaningar. Flera av dessa cuticular kolväten (CHC)-föreningar fungerar också som semiochemical signaler, och som sådan medla pheromonal kommunikation mellan medlemmar av samma art, eller i vissa fall mellan olika arter, och påverka beteenden. Specialiserade celler kallas oenocytes betraktas som den främsta platsen för CHC syntes. Men relativt lite är känt om medverkan av oenocytes i regleringen av den biosyntetiska, transport och vägar nedfall bidrar till CHC utgång. Med tanke på den viktiga roll som CHCs spela på flera aspekter av insekters biologi, inbegripet kemiska kommunikation, uttorkning motstånd, och immunitet, är det viktigt att få en större förståelse för de molekylära och genetiska regleringen av CHC produktionen inom dessa specialiserade celler. Den vuxna oenocytes av<em> D. melanogaster</em> Finns inom buken integument, och är metamerically klädd i band-liknande kluster strålar längs inre cuticular ytan på varje buken segment. I denna video artikeln visar vi en dissektion teknik som används för beredning av oenocytes från vuxna<em> D. melanogaster</em>. Specifikt ger vi en detaljerad steg-för-steg demonstration av (1) hur man filé förbereda en vuxen<em> Drosophila</em> Mage, (2) hur man identifierar oenocytes och urskilja dem från andra vävnader, och (3) hur man tar bort intakt oenocyte kluster från buken hölje. En kort experimentell illustration på hur denna beredning kan användas för att undersöka uttrycket av gener involverade i kolväte syntes ingår. Den dissekerade preparatet visat häri kommer att möjliggöra en detaljerad molekylär och genetisk analys av oenocyte funktion i den vuxna bananflugan.
Protocol
Discussion
I denna video artikeln presenterar vi en detaljerad dissektion protokoll för utarbetandet av oenocytes från vuxna D. melanogaster på ett sätt som lämpar sig för molekylär analys. Ett förkortat textbaserade hänsyn till dissekeringsmetoden har beskrivits på annat håll 2, och den resulterande oenocyte preparatet har visat sig vara lämplig för utvinning av både RNA och protein 2. Med hjälp av detta preparat kan det också vara möjligt att utveckla metoder för odling av explant…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vi vill tacka Amsale Belay för hennes hjälp med att filma den här videon artikel. Detta arbete har finansierats av CIHR, NSERC och CRC bidrag till JDL.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard | Dow Corning | |||
| Tungsten Wire | Ted Pella, Inc. | 27-11 | 0.005”/20’ | |
| Forceps | Dumont | 11252-30 | #5 | |
| Shields and Sang M3 Insect Medium | Sigma | S3652 | ||
| RNeasy Micro Kit | Qiagen | 74004 | ||
| qScript cDNA Synthesis Kit | Quanta Biosciences | 95047-100 | ||
| Monoject Hypodermic Needle | Harvard Apparatus | 722289 | 20G1 with aluminum hub |
References
- Wielowiejski, H. Ueber das blutgewebe der insekten. Zeit. Wiss. Zool. 43, 512-536 .
- Krupp, J. J., Kent, C., Billeter, J. C., Azanchi, R., So, A. K., Schonfeld, J. A., Smith, B. P., Lucas, C., Levine, J. D. Social experience modifies pheromone expression and mating behavior in male Drosophila melanogaster. Curr. Biol. 18, 1373-1383 (2008).
- Locke, M. Surface membranes, Golgi complexes, and vacuolar systems. Annu. Rev. Entomol. 48, 1-27 (2003).
- Billeter, J. C., Atallah, J., Krupp, J. J., Millar, J. G., Levine, J. D. Specialized cells tag sexual and species identity in Drosophila melanogaster. Nature. 461, 987-991 (2009).
- Gould, A. P., Elstob, P. R., Brodu, V. Insect oenocytes: a model system for studying cell-fate specification by Hox genes. J. Anat. 199, 25-33 (2001).
- Lawrence, P. A., Johnston, P. Cell lineage of the Drosophila abdomen: the epidermis, oenocytes and ventral muscles. J. Embryol. Exp. Morphol. 72, 197-208 (1982).
- Johnson, M. B., Butterworth, F. M. Maturation and aging of adult fat body and oenocytes in Drosophila as revealed by light microscopic morphometry. J. Morphol. 184, 51-59 (1985).
- Gutierrez, E., Wiggins, D., Fielding, B., Gould, A. P. Specialized hepatocyte-like cells regulate Drosophila lipid metabolism. Nature. 445, 275-280 (2007).
- Marcillac, F., Bousquet, F., Alabouvette, J., Savarit, F., Ferveur, J. F. A mutation with major effects on Drosophila melanogaster sex pheromones. Genetics. 171, 1617-1628 (2005).
- Chertemps, T., Duportets, L., Labeur, C., Ueyama, M., Wicker-Thomas, C. A female-specific desaturase gene responsible for diene hydrocarbon biosynthesis and courtship behaviour in Drosophila melanogaster. Insect Mol. Biol. 15, 465-473 (2006).
- Legendre, A., Miao, X. X., Da Lage, J. L., Wicker-Thomas, C. Evolution of a desaturase involved in female pheromonal cuticular hydrocarbon biosynthesis and courtship behavior in Drosophila. Insect. Biochem. Mol. Biol. 38, 244-255 (2008).
- Shirangi, T. R., Dufour, H. D., Williams, T. M., Carroll, S. B. Rapid evolution of sex pheromone-producing enzyme expression in Drosophila. PLoS Biol. 7, e1000168-e1000168 (2009).
