Cultura Slice organotípicas de E18 cérebros de ratos

Abstract

Culturas fatia organotípicas de cérebros de roedores embrionárias são amplamente utilizados para estudar o desenvolvimento do cérebro. Embora muitas vezes há vantagens para um sistema de in-vivo, culturas fatia organotípicas permitem realizar uma série de manipulações que não são actualmente viável in-vivo. Até à data, organtotypic culturas fatia embrionárias cérebro têm sido utilizados para acompanhar células individuais usando a microscopia de lapso de tempo, manipular a expressão de genes no emanances ganglionares (uma região que é difícil de alvo por in-utero eletroporação), bem como para farmacológicos estudos. Neste protocolo de vídeo demonstramos como fazer culturas fatia organotípicas de rato dia embrionário 18 embriões. O protocolo envolve dissecar os embriões, incorporando-os no gelo derreter em baixo agarose, cortando o cérebro incorporado na vibratome e, finalmente, as fatias de revestimento para filtros em placas de cultura. Este protocolo também é aplicável na sua forma actual de fazer culturas fatia organotípicas de diferentes idades embrionárias para ambos os ratos e camundongos.