Purifiant l'ADN plasmidique des colonies bactériennes en utilisant le kit Qiagen Miniprep Kit

Abstract

Purification d'ADN plasmidique de E. coli est une technique de base pour le clonage moléculaire. D'épuration à petite échelle (miniprep) de moins de 5 ml de culture bactérienne est un moyen rapide pour la vérification clone ou l'isolement de l'ADN, suivie par d'autres réactions enzymatiques (réaction en chaîne de la polymérase et la digestion des enzymes de restriction). Ici, nous enregistrée sur bande vidéo les procédures générales de miniprep à travers le QIAGEN Miniprep Kit QIAprep 8, visant à introduire cette technique très efficace pour les débutants en général des techniques de biologie moléculaire. La procédure entière est basée sur lyse alcaline des cellules E. coli suivie par adsorption de l'ADN sur de la silice en présence du sel. Il se compose de trois étapes: 1) la préparation et la compensation d'un lysat bactérien, 2) l'adsorption de l'ADN sur la membrane QIAprep, 3) le lavage et l'élution de l'ADN plasmidique. Toutes les étapes sont réalisées sans l'utilisation de phénol, du chloroforme, CsCl, le bromure d'éthidium, et sans précipitation à l'alcool. Il prend généralement moins de 2 heures pour terminer la procédure.