Всего записей сотовый от мозга взрослого дрозофилы
Summary
Это видео демонстрирует процедуру выделения весь мозг от взрослых дрозофил при подготовке к записи от отдельных нейронов с использованием стандартных технологий целом клетки. Она включает в себя образы GFP меченых клеток и нейронов рассматриваться во время записи.
Abstract
В этом видео мы продемонстрируем процедуру выделения весь мозг от взрослых дрозофил при подготовке к записи от отдельных нейронов. Мы начнем с описания рассекает решение и захвата взрослые самки, используемые в наших исследованиях. Процедура снятия весь мозг неповрежденным, в том числе и оптических долях, проиллюстрировано. Препарирование вышележащих трахеи также показано на рисунке. Изолированных мозг не только малой, но нуждается в особом уходе в обработке на данном этапе, чтобы предотвратить повреждение нейронов, многие из которых близки к внешней поверхности ткани. Мы покажем, как специальный держатель мы разработали для стабилизации мозга в записи камеры. Стандартный электрофизиологии создали используется для записи с отдельных нейронов или пары нейронов. Флуоресцентные изображения, рассматривается через микроскоп записи, от GAL4 линии вождения GFP выражение (GH146) показывает, как проекционных нейронов (PNS) отмечены в живой мозг. Высокая мощность Номарского изображение показывает зрения одного нейрона, которые преследуют за весь записи клетки. Когда мозг успешно удален без повреждения, большинство нейронов спонтанно активных, выпустив потенциалов действия и / или экспонирование спонтанных синаптических входа. Это, в месте подготовки, в котором все записи ячейки определили нейронов в мозг целиком могут быть объединены с генетических и фармакологических манипуляций, является полезной моделью для изучения клеточной физиологии и пластичность во взрослой ЦНС.
Protocol
Discussion
Изолированных целом подготовка мозга мы проиллюстрируем в этом видео позволяет оценить сотовой механизмы, лежащие возбудимости и синаптической передачи в выявленных нейронов, в том числе в обонятельных путей обработки, во взрослом мозге дрозофилы (Gu и О Дауд, 2006). Такой подход является дополните?…
Acknowledgements
Эта работа была поддержана NIH грант NS27501 к DKOD. Дополнительная поддержка для этой работы была предоставлена программа HHMI профессор Грант DKOD.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| #5 Foceps | Tool | FST by DUMONT | No. 11251-10 | Be careful, never damage the fine tips of forceps |
| Papain | Reagent | Worthington | 3126 | 20 U/ml activated by 1 mM L-cysteine |
| Dissecting microscope | SMZ-2B Model:C-PS | Nikon | Equipped with gooseneck fiber optic lights positioned a low angle | |
| Needle & Syringe | PrecisionGlide®?, Becton Dickinson & Co | 305175 & 309602 | Cheap and durable | |
| Upright microscope | Axioskop2 FS plus | Zeiss | Equipped with a fixed stage, 40X water immersion objective, Nomarski optics, and fluorescent lamp | |
| Patch clamp amplifier | 200 B | Molecular device | ||
| Digidata D-A converter | 1322A | Molecular device |
References
- Gu, H., O Dowd, D. K., K, D. Cholinergic synaptic transmission in Adult Drosophila Kenyon cells in situ. Journal of Neuroscience. 26, 265-272 (2006).
- Wilson, R. I., Turner, G. C., Laurent, G. Transformation of olfactory representations in the Drosophila antennal lobe. Science. 303, 366-370 (2004).
