Transformação do DNA plasmidial em E. coli Usando o método de choque térmico

Abstract

Transformação do DNA plasmidial em E. coli utilizando o método de choque térmico é uma técnica básica de biologia molecular. Ele consiste na inserção de um produto estrangeiro plasmídeo ou ligadura em bactérias. Este protocolo de vídeo descreve o método tradicional de transformação usando comercialmente disponíveis quimicamente bactérias competentes de Genlantis. Após uma curta incubação no gelo, uma mistura de bactérias quimicamente competentes e DNA é colocado a 42 ° C por 45 segundos (choque térmico) e depois colocados de volta no gelo. SOC media é adicionado e as células transformadas são incubados a 37 ° C por 30 min com agitação. Para ter certeza de isolar as colônias, independentemente da eficiência de transformação, duas quantidades de bactérias transformadas são banhados. Este protocolo tradicional pode ser utilizado com sucesso para transformar a maioria disponível comercialmente bactérias competentes. O turbocells de Genlantis também pode ser usado em um protocolo de transformação romance de 3 minutos, descrito no manual de instruções.