사람의 피부에서 성인 상피 줄기 세포의 분리 및 문화
Summary
인간의 피부에서 가능한 성인 상피 줄기 세포를 분리의 신속하고 강력한 방법이 설명되어 있습니다. 방법은 모낭과 세포 배양에 대한 단세포 suspensions 또는 조직의 파편의 격리에 따버릴 다음 피부 콜라겐 매트릭스의 효소 소화를 활용합니다.
Abstract
모든 자기 갱신 조직의 항상성은 성인 줄기 세포에 따라 좌우됩니다. undifferentiated 줄기 세포는 비대칭 분열을 받다, 그들은 줄기 세포 표현형, 그리고 줄기 세포 틈새에서 마이 그 레이션 급속한 확산을 받다하고 말기 조직을 repopulate하기 위해 차별화 교통 – 확장 세포를 (TA 세포) 유지 딸 세포를 생성합니다.
상피 줄기 세포는 체외 proliferative 가능성이 높은과 같은 느린 – 자전거 생체내 1-3에서 세포를 레이블 – 유지와 세포로 표피, 머리 뿌리하고, 소장에서 발견되었습니다. 성인, 조직 고유의 줄기 세포들이 정상적인 physiologic 매출 동안뿐만 아니라 스트레스의 4-5 시간 동안 거주하고있는 조직의 재생에 대한 책임이 있습니다. 또한, 줄기 세포는 일반적으로 조직 내에서 여러 셀에 6 타입 야기할 수있는 능력을 보유하고 다중 강력한 것으로 간주됩니다. 예를 들어, 쥐 머리 뿌리의 줄기 세포는 표피, 피지선 땀샘과 모낭 7-9를 생성할 수 있습니다. 우리는 인간의 머리 뿌리의 팽창 지역에서 줄기 세포가 여러 가능성 10 전시 것으로 나타났습니다.
줄기 세포가 발달 생물학, 분화, tumorigenesis과 가능한 치료 유틸리티에 대한 공부를 위해 체외 시스템에 해당하는 유틸리티로 인해 생명 의학 연구에 가치있는 도구가되었습니다. 그것은 성인 상피 줄기 세포는 같은 ectodermal dysplasias, monilethrix, 네더턴 증후군, Menkes 질환, 유전 epidermolysis bullosa 및 alopecias 11-13으로 질병의 치료에 유용하게 사용될 가능성이 높습니다. 또한, 같은 화상 상처, 만성 상처와 궤양 등의 피부 문제 요법 14,15 관련 줄기 세포에서 도움이 될 것입니다. pluripotent 상태 (IPS 세포) 16,17로 성인 세포의 프로그래밍에 대한 잠재력을 감안할 때, 인간의 피부에 쉽게 접근 및 확장 성인 줄기 세포를 포함한 질환의 광범위한 유도 및 다운 스트림 치료를위한 세포의 중요한 원천을 제공할 수 있습니다 당뇨병과 파킨슨병.
Protocol
Discussion
설명 세포 추출과 문화 방법은 놀라울 정도로 손쉬운하고 재현할 수 있습니다. 우리는 상속 피부 결함 18 환자를 포함하여 넓은 연령 범위에 걸쳐 개인의 수십에서 상피 줄기 세포 문화를 생성합니다. 조직 수확 당일에 과정을 시작하는 것이 좋습니다이지만 전지는 필요한 경우 야간 선적을 촉진시켜, 며칠 동안 얼음 미디어 가능한 상태로 유지됩니다. 폐기 facelift의 피부가 단세포 suspensio…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 NIH / NCI 부여 R01CA – 118916에 의해 투자입니다
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | GIBCO | 11995 | ||
| Hams F12 | GIBCO | 11765 | ||
| Fetal Bovine Serum (FBS) | GIBCO | 16000 | ||
| Insulin | GIBCO | 12585 | ||
| T3 | Sigma | T-2752 | ||
| Transferrin | Roche | 10652202001 | ||
| Hydrocortisone | Sigma | H-4001 | ||
| Cholera Toxin | Sigma | C8052 | ||
| Epidermal growth factor (EGF) | Sigma | E-9644 | ||
| Adenine | Sigma | A9795 | ||
| Trypsin(10X) | GIBCO | 15090 | ||
| VERSENE | GIBCO | 15040 | ||
| G418 Sulfate | Cellgro | 30-234-CR | ||
| Hanks’ Balanced Salt solution | Sigma | H6648 | ||
| 1X PBS | Cellgro | 21-040-CV | ||
| Mitomycin C | Roche | 10107409001 | ||
| Penicillin/streptomycin | Invitrogen | 15140122 | ||
| Dispase | Invitrogen | 17105 | ||
| Crystal Violet | Fisher | C581-25 |
Keratinocyte media (KCM)
[DMEM and Ham s F12 (GIBCO, 3:1), adenine (Sigma, 180 mM), 10% fetal bovine serum (GIBCO), cholera toxin (ICN, 0.1 nM), penicillin/streptomycin (GIBCO, 100 U/ml and 100 mg/ml, respectively), hydrocortisone (Sigma, 0.4 mg/ml, 1.1 mM), T/T3 (transferrin, GIBCO, 5 μg/ml, 649 nM; and triiodo-l-thyronine, Sigma, 2 nM), insulin (Sigma, 5 mg/ml, 862 nM), and EGF (Sigma, 10 ng/ml, 1.6 nM), pH 7.2]
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