Een snelle, robuuste manier van isoleren levensvatbare volwassen epitheliale stamcellen uit menselijke huid is beschreven. De methode maakt gebruik van enzymatische afbraak van de huid collageen matrix, gevolgd door het plukken van de haarfollikels en isolatie van single cell suspensies of weefsel fragmenten voor celkweek.
De homeostase van alle zelf-vernieuwing weefsels is afhankelijk van volwassen stamcellen. Als ongedifferentieerde stamcellen ondergaan asymmetrische divisies, genereren ze dochter cellen die de stamcellen fenotype en doorvoer-versterkende cellen (TA-cellen) die migreren van de stamcel niche, ondergaan een snelle proliferatie en terminaal differentiëren om het weefsel opnieuw te bevolken behouden.
Epitheliale stamcellen zijn geïdentificeerd in de epidermis, haarfollikels, en darm als cellen met een hoge in vitro proliferatieve potentieel en als slow-fiets-label het behoud van cellen in vivo 1-3. Volwassen, weefsel-specifieke stamcellen zijn verantwoordelijk voor de regeneratie van de weefsels waarin zij wonen tijdens de normale fysiologische omzet als in tijden van stress 4-5. Bovendien worden stamcellen algemeen beschouwd als multi-potente, bezitten het vermogen om aanleiding te geven tot meerdere celtypen in het weefsel 6. Zo kan bijvoorbeeld knaagdieren haarzakjes stamcellen te genereren epidermis, talgklieren en haarfollikels 7-9. We hebben aangetoond dat stamcellen uit de menselijke haar follikel bobbel regio multi-potentialiteit 10 vertonen.
Stamcellen zijn uitgegroeid tot een waardevol hulpmiddel in het biomedisch onderzoek, als gevolg van hun nut als een in vitro systeem voor het bestuderen van ontwikkelingsbiologie, differentiatie, tumorigenese en voor hun mogelijke therapeutische nut. Het is waarschijnlijk dat volwassen epitheliale stamcellen nuttig zal zijn bij de behandeling van ziekten zoals ectodermale dysplasie, monilethrix, Netherton syndroom, ziekte van Menkes, erfelijke epidermolysis bullosa en alopecia 11-13. Daarnaast zullen ook andere huidproblemen zoals brandwonden, chronische wonden en zweren profiteren van stamcellen verwante therapieën 14,15. Gezien het potentieel voor herprogrammering van volwassen cellen in een pluripotente staat (iPS cellen) 16,17, het gemakkelijk toegankelijk en uitbreidbaar volwassen stamcellen in de menselijke huid kan een waardevolle bron van cellen voor inductie-en downstream-therapie voor een breed scala van ziekte, met inbegrip diabetes en de ziekte van Parkinson.
De cel beschreven extractie en cultuur methodes zijn verrassend gemakkelijke en reproduceerbaar zijn. We hebben gegenereerd epitheliale stamcellen kweken uit tientallen van personen over een ruime leeftijdsgroep, waaronder patiënten met erfelijke afwijkingen van de schil 18. Het beste is om het proces te beginnen op de dag van weefsel oogst, maar cellen levensvatbaar blijven in de media op ijs gedurende meerdere dagen, het vergemakkelijken van de scheepvaart 's nachts als dat nodig is. Afgedankte facelif…
The authors have nothing to disclose.
Dit werk wordt gefinancierd door NIH / NCI verlenen R01CA-118916
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
DMEM | GIBCO | 11995 | ||
Hams F12 | GIBCO | 11765 | ||
Fetal Bovine Serum (FBS) | GIBCO | 16000 | ||
Insulin | GIBCO | 12585 | ||
T3 | Sigma | T-2752 | ||
Transferrin | Roche | 10652202001 | ||
Hydrocortisone | Sigma | H-4001 | ||
Cholera Toxin | Sigma | C8052 | ||
Epidermal growth factor (EGF) | Sigma | E-9644 | ||
Adenine | Sigma | A9795 | ||
Trypsin(10X) | GIBCO | 15090 | ||
VERSENE | GIBCO | 15040 | ||
G418 Sulfate | Cellgro | 30-234-CR | ||
Hanks’ Balanced Salt solution | Sigma | H6648 | ||
1X PBS | Cellgro | 21-040-CV | ||
Mitomycin C | Roche | 10107409001 | ||
Penicillin/streptomycin | Invitrogen | 15140122 | ||
Dispase | Invitrogen | 17105 | ||
Crystal Violet | Fisher | C581-25 |
Keratinocyte media (KCM)
[DMEM and Ham s F12 (GIBCO, 3:1), adenine (Sigma, 180 mM), 10% fetal bovine serum (GIBCO), cholera toxin (ICN, 0.1 nM), penicillin/streptomycin (GIBCO, 100 U/ml and 100 mg/ml, respectively), hydrocortisone (Sigma, 0.4 mg/ml, 1.1 mM), T/T3 (transferrin, GIBCO, 5 μg/ml, 649 nM; and triiodo-l-thyronine, Sigma, 2 nM), insulin (Sigma, 5 mg/ml, 862 nM), and EGF (Sigma, 10 ng/ml, 1.6 nM), pH 7.2]