Dissezione di un occhio mouse per un monte intero di dell'epitelio pigmentato retinico
Summary
Una dimostrazione formale della dissezione di un occhio del mouse, per un monte di tutto l'epitelio pigmentato retinico.
Abstract
L'epitelio pigmentato retinico (RPE) si trova nella parte posteriore dell'occhio dei mammiferi, appena sotto la retina neurale, che contiene i fotorecettori (coni e bastoncelli). La RPE è un monostrato di cellule pigmentate cuboidali e associa a stretto contatto con la retina neurale sopra di esso. Questa associazione fa la RPE di grande interesse per i ricercatori che studiano le malattie della retina. La RPE è anche il luogo di un test in vivo di omologia-diretto di riparazione del DNA, il test p Nazioni Unite. L'occhio del mouse è particolarmente difficile da analizzare per le sue ridotte dimensioni (circa 3,5 millimetri di diametro) e la sua forma sferica. Questo articolo illustra in dettaglio una procedura per la dissezione degli occhi con conseguente montare tutta la RPE. In questa procedura, si mostra come lavorare con e non contro, la struttura sferica dell'occhio. In breve, il tessuto connettivo, muscolare e del nervo ottico vengono rimossi dalla parte posteriore dell'occhio. Poi, la cornea e la lente sono stati rimossi. Successivamente, tagli strategici sono realizzati che si traducono in appiattimento significativa del tessuto residuo. Infine, la retina neurale è leggermente sollevato, rivelando una RPE intatto, che è ancora collegato al sottostante coroide e sclera. Questo monte intera può essere utilizzato per eseguire il test p Nazioni Unite o per la valutazione immunoistochimica o immunofluorescenza del tessuto RPE.
Protocol
Discussion
La RPE è il sito delle Nazioni Unite p test, un test in vivo di omologia-diretto di riparazione. Il saggio p ONU è stata usata per studiare gli effetti dei danni del DNA diverso 1,2 e segnalazione danni del DNA e geni di riparazione 3,4,5 sulla frequenza di omologia-diretto di riparazione. Questo test è molto sensibile, rileva cella singola eventi sulla RPE 1. Si può anche rilevare le differenze nei tempi di omologia-diretto eventi di …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto dal National Institute of Environmental Health Sciences [K22ES012264 a AJRB] e un American Cancer Society InstitutionalResearch Grant [ACS-IRG-00-173-04] pilota projectaward [a AJRB]. Ringraziamo anche i membri del laboratorio Vescovo per la lettura critica del manoscritto e commenti sul video e Adam Brown in particolare, per l'esempio di cosa non fare. Ringraziamo il Dr. Donald McEwen del Cancro Greehey per bambini Istituto di Ricerca per averci permesso l'uso della sua portata dissezione / videocamera set-up per le riprese del video dissezione. Ringraziamo Daron Brown Corte strumenti per l'affilatura e la riparazione dei nostri strumenti di microdissezione.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| straight forceps | Roboz | RS-4903 | tip: .08 x .04 mm material: INOX | |
| 45° forceps | Roboz | RS-5005 | tip: .05 x.01 mm material: INOX | |
| 15° “up” forceps | Roboz | RS-5045A | tip: .1 x.06 mm material: INOX | |
| spring scissors | Roboz | RS-5604 | comb. tip width 0.3mm cutting edge length 3mm material: stainless steel | |
| binocular dissecting microscope | Ziess | Discovery V.8 | use reflected light source | |
| phalloidin | Invitrogen | A22283 | Alexa Fluor 546 |
References
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