אצבע מקל דגימה דם מתודולוגיה לקביעת אפופטוזיס-תרגיל המושרה הלימפוציטים
Summary
תרגיל מסוגל גרימת מות תאים מתוכנת בתאי המערכת החיסונית. ישנן מגבלות מדידה שונים, בעיקר בנוגע לכמות הזמן הדרוש כדי לבודד ולטפל דגימת דם לפני האבחון. הפגינו הוא הליך מהיר פולשנית לניתוח אפופטוזיס האימון המושרה לימפוציטים.
Abstract
פעילות גופנית היא גירוי פיזיולוגי מסוגל גרימת מות תאים מתוכנת בתאי המערכת החיסונית. עד כה, מגבלות שונות זוהו עם המדידה של תופעה זו, במיוחד בנוגע למשך הזמן הנדרש כדי לבודד ולטפל דגימת דם לפני ההערכה של מוות של תאים. בגלל זה, קשה לקבוע האם עליות דיווח אפופטוזיס תא החיסון ניתן תרמו ההשפעה בפועל של פעילות גופנית על המערכת, או השתקפות של זמן עיבוד צורך בסופו של דבר להשיג את המדידה. במאמר זה אנו מדגימים הליך מהיר פולשנית לניתוח אפופטוזיס האימון המושרה לימפוציטים. שלא כמו טכניקות אחרות, דם כל מתווסף פאנל נוגדן מיד עם קבלת המדגם. לאחר תקופת הדגירה, כדוריות דם אדומות lysed דגימות מוכנים להיות מנותח. השימוש בנוהל אצבע מקל דגימה מקטין את נפח הדם הנדרש, מקטינה את אי נוחות לנבדקים.
Protocol
Discussion
אוסף פולשנית מדגם הליך ניתוח שלאחר מכן באה לידי ביטוי לניתוח שלבי בשלבים מוקדמים ומאוחרים של אפופטוזיס האימון המושרה לימפוציטים. ניתן גם בבירור לכלול תאים אלה, המהווים נמקי, ולא אפופטוטיים. הליך זה מתגבר על החסרונות ואי נוחות הקשורה venipuncture פולשנית מאזור antecubital בנקוד…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
מחקר זה מומן על ידי מענק הפקולטה חדש מהמועצה הפקולטה מלגות בבית המערבי אוניברסיטת קנטאקי.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Flow Cytometry Binding Buffer | eBioscience | 00-4222-26 | ||
| RBC Lysis Buffer | eBioscience | 00-4333-57 | ||
| Lancet Device | Accu Check Soft Touch | Roche Diagnostics Corp. | ||
| Capillary tubes | Heparinized Capillary Tubes | Chase Scientific Glass, Inc. | 501 | |
| Centrifuge | GmC Lab | Gilson | PMS-880 | |
| Annexin V-FITC Conjugated | Biovision Inc. | K201-400-1 | ||
| CD4-PE Conjugated | Anti-human, clone RPA-T4 | eBioscience | 12-0049-42 | |
| CD8-PE Conjugated | Anti-human, clone OKT8 | eBioscience | 12-0086-73 | |
| CD19-PE Conjugated | Anti-human, clone HIB19 | eBioscience | 12-0199-42 | |
| 7-AAD Viability Staining Solution | eBioscience | 00-6993-50 | ||
| CD45RA-APC Conjugated | Anti-human, clone HI100 | eBioscience | 17-0458-42 | |
| Flow cytometer | C6 | Accuri |
References
- Simpson, R. J., Florida-James, G. D., Whyte, G. P., Black, J. R., Ross, J. A., Guy, K. Apoptosis does not contribute to the blood lymphocytopenia observed after intensive and downhill treadmill running in humans. Res. Sports Med. 15, 157-174 (2007).
- Steensberg, A., Morrow, J., Toft, A. D., Bruunsgaard, H., Pedersen, B. K. Prolonged exercise, lymphocyte apoptosis and F2-isoprostanes. Eur. J. Appl. Physiol. 87, 38-42 (2002).
- Mooren, F. C., Bloming, D., Lechtermann, A., Lerch, M. M., Völker, K. Lymphocyte apoptosis after exhaustive and moderate exercise. J. Appl. Physiol. 93, 147-153 (2002).
- Peters, E. M., Eden, M. V. a. n., Tyler, N., Ramautar, A., Chutergoon, A. A. Prolonged exercise does not cause lymphocyte DNA damage or increased apoptosis in well-trained endurance athletes. Eur. J. Appl. Physiol. 98, 124-131 (2006).
- Wang, J. -. S., Huang, Y. -. H. Effects of exercise intensity on lymphocyte apoptosis induced by oxidative stress in men. Eur. J. Appl. Physiol. 95, 290-291 (2005).
- Mooren, F. C., Lechtermann, A., Völker, K. Exercise-induced apoptosis of lymphocytes depends on training status. Med. Sci. Sports Exerc. 36, 1476-1483 (2004).
- Navalta, J. W., Sedlock, D. A., Park, K. -. S. Blood treatment influences the yield of apoptotic lymphocytes after maximal exercise. Med. Sci. Sports Exerc. 37, 369-373 (2005).
