Summary

Инъекции аутологичной крови в модели спонтанного внутримозгового кровоизлияния у мышей

Published: August 24, 2011
doi:

Summary

Аутологичных модель инъекции крови внутримозгового кровоизлияния у мышей, описанные в этом протокол использует двойные технику инъекции, чтобы минимизировать риск рефлюкс крови до иглы трек, не антикоагулянтов в насосной системе, и уничтожает все мертвое пространство и сильфонные трубки в системе.

Abstract

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model. While ICH accounts for 10-15% of all strokes, there remains no specific effective therapy. The autologous blood injection model in mice involves the stereotaxic injection of arterial blood into the basal ganglia mimicking a spontaneous hypertensive hemorrhage in man. The response to hemorrhage can then be studied in vivo and the neurobehavioral deficits quantified, allowing for description of the ensuing pathology and the testing of potential therapeutic agents. The procedure described in this protocol uses the double injection technique to minimize risk of blood reflux up the needle track, no anticoagulants in the pumping system, and eliminates all dead space and expandable tubing in the system.

Protocol

1. Подготовка оборудования Протрите стереотаксической рамы и насоса с 75% этанола, чтобы минимизировать бактериального загрязнения. Стерилизовать Гамильтон шприц и иглу плавленого кварца. Примечание: Если химической стерилизации используют, не забудьте промыть несколь?…

Discussion

Это хирургический шаблон внутримозгового кровоизлияния у мышей использовании аутологичных результаты артерии кровь в хвост воспроизводимые модели спонтанного базальных ганглиев кровоизлияния. Модель ICH у мышей имеет то преимущество, наличие трансгенных животных для исследования п…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Работа финансировалась стипендию от Института трансляционной медицины и терапии, а также обучение грант от Института медицины и техники (T32HL007954) при Университете Пенсильвании и Марлен Л. Коэн и Джером H. Fleisch ученого грант на Университет штата Коннектикут Центр Здоровья (LHS) и NIH NS-029331 (FAW).

Materials

Stereotaxic frame for mouse neurosurgery (Stoelting, 51925)

Microinfusion pump and processor (UMP-3 and Micro4, World Precision Instruments, Sarasota, FL)

Mouse warmer (Stoelting, 50300)

Inhalational mouse anesthesia (Braintree Scientific, EZ-AF9000)

25 μL gastight borosilicate Hamilton syringe with coated plunger and no needle

(Hamilton company, Reno, NV, 1702RN syringe: 765401, ferrule: 30949, spacer: 30946)

fused silica needle cut to 2 cm length (Hamilton, 17739)
*note Hamilton syringe and fused silica needle may be reused for multiple surgeries if sterilized prior to each surgery. These materials are crucial to avoid blood clotting.

Sterile surgical gloves

Surgical gown, bonnet and mask

Betadine

75% ethanol

sterile 27 g needle (single use)

sterile 1 cc syringe (single use)

sterile surgical blade

Cidex

sterile water

buprenorphine and isoflurane

sterile gauze

paraffin wax paper squares

Veterinary surgical glue (Vetbond, 3M, St. Paul, MN)

References

  1. Hua, Y., Schallert, T., Keep, R. F., Wu, J., Hoff, J. T., Xi, G. Behavioral Tests After Intracerebral Hemorrhage in the Rat. Stroke. 33, 2478-2484 (2002).
  2. James, M., Warner, D., Laskowitz, D. Preclinical Models of Intracerebral Hemorrhage: A Translational Perspective. Neurocritical Care. 9, 139-152 (2008).
  3. Foerch, C., Arai, K., Jin, G., Park, K. -. P., Pallast, S., van Leyen, K., Lo, E. H. Experimental Model of Warfarin-Associated Intracerebral Hemorrhage. Stroke. 39, 3397-3404 (2008).
  4. Nakamura, T., Xi, G., Hua, Y., Schallert, T., Hoff, J. T., Keep, R. F. Intracerebral hemorrhage in mice: model characterization and application for genetically modified mice. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 24, 487-494 (2004).
  5. Rynkowski, M. A., Kim, G. H., Komotar, R. J., Otten, M. L., Ducruet, A. F., Zacharia, B. E., Kellner, C. P., Hahn, D. K., Merkow, M. B., Garrett, M. C. A mouse model of intracerebral hemorrhage using autologous blood infusion. Nat. Protocols. 3, 122-128 (2008).
  6. Wang, J., Fields, J., Doré, S. The development of an improved preclinical mouse model of intracerebral hemorrhage using double infusion of autologous whole blood. Brain Research. 1222, 214-221 (2008).
  7. Zhao, X., Sun, G., Zhang, J., Strong, R., Song, W., Gonzales, N., Grotta, J. C., Aronowski, J. Hematoma resolution as a target for intracerebral hemorrhage treatment: Role for peroxisome proliferator-activated receptor γ in microglia/macrophages. Annals of Neurology. 61, 352-362 (2007).

Play Video

Cite This Article
Sansing, L. H., Kasner, S. E., McCullough, L., Agarwal, P., Welsh, F. A., Kariko, K. Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice. J. Vis. Exp. (54), e2618, doi:10.3791/2618 (2011).

View Video