Een microfluïdische apparaat met Groove patronen voor het bestuderen van Cellular Gedrag
Summary
Beschrijven we een protocol voor de fabricage van microfluïdische apparaten die cel te vangen en cultuur kunnen inschakelen. In deze benadering patroon microstructuren, zoals groeven in microfluïdische kanalen worden gebruikt om lage shear stress regio's waarbinnen de cel kan dock te creëren.
Abstract
Beschrijven we een microfluïdische apparaat met microgrooved patronen voor het bestuderen van cellulaire gedrag. Deze microfluïdische platform bestaat uit een top vloeibare kanaal en een bodem microgrooved substraat. Te fabriceren van de microgrooved kanalen, was een top poly (dimethylsiloxaan) (PDMS) mal met de indruk van de microfluïdische kanalen op elkaar afgestemd en gebonden aan een microgrooved substraat. Met behulp van dit apparaat, de muis fibroblast cellen werden geïmmobiliseerd en patronen binnen de microgrooved substraten (25, 50, 75 en 100 micrometer breed). Om apoptose in een microfluïdische apparaat studie, was de media die waterstof peroxide, Annexine V en propidiumjodide doorbloed in de vloeibare kanaal voor 2 uur. We vonden dat de cellen blootgesteld aan de oxidatieve stress apoptotische werd. Deze apoptotische cellen werden bevestigd door Annexine V die gebonden aan phosphatidylserine bij de buitenste leaflet van de plasmamembraan tijdens het apoptose-proces. Met behulp van deze microfluïdische apparaat met microgrooved patronen, was het apoptose-proces waargenomen in real-time en geanalyseerd met behulp van een omgekeerde microscoop met een incubatiekamer (37 ° C, 5% CO 2). Daarom kon dit microfluïdische apparaat opgenomen met microgrooved substraten nuttig zijn voor het bestuderen van de cellulaire gedrag en het uitvoeren van high-throughput screening van geneesmiddelen.
Protocol
Discussion
Cellen werden geïmmobiliseerd en patronen binnen de microgrooved substraten in een microfluïdische apparaat. Het proces van apoptose cellen blootgesteld aan waterstofperoxide werd waargenomen in real-time en geanalyseerd met behulp van Annexine V en propidiumjodide. Zo zou deze microfluïdische apparaat met Microgroove kanalen bruikbaar zijn voor high-throughput screening van geneesmiddelen.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PDMS | Reagent | K.R. Anderson Co. Inc. | 2065622 | Poly(dimethylsiloxane), Dow Corning Sylgard 184 (8.6 lb) |
| DMEM | medium | Invitrogen | 11965 | Dulbecco’s Modified Eagle’s Media |
| FBS | serum | Invitrogen | 10082-147 | Fetal Bovine Serum |
| Hydrogen peroxide | Reagent | Sigma Aldrich | H1009 | |
| Apoptosis assay | Invitrogen | V13242 | Annexin A, propidium iodide | |
| Negative photoresist | Microchem | SU-8 2015 | ||
| Si wafer | Tool | 4 inch silicone wafer | ||
| Reactive oxygen plasma | Reagent | Harrick Scientific | treat wafer 5 min at 30W | |
| inverted microscope | Tool | Nikon | TE 2000 |
References
- Chung, B. G., Park, J. W., Hu, J. S., Huang, C., Monuki, E. S., Jeon, N. L. A hybrid microfluidic-vacuum device for interfacing with conventional cell culture platform. BMC Biotechnol. 7, (2007).
- Khademhosseini, A., Yeh, J., Eng, G., Karp, J., Kaji, H., Borenstein, J., Farokhzad, O. C., Langer, R. Cell docking inside microwells within reversibly sealed microfluidic channels for fabricating multiphenotype cell arrays. Lab Chip. 5, 1380-1386 (2005).
- Whittemore, E. R., Loo, D. T., Watt, J. A., Cotman, C. W. A detailed analysis of hydrogen peroxide-induced cell death in primary neuronal culture. Neuroscience. 67, 921-932 (1995).
