Ein Gradient-Erzeugung Mikrofluidikvorrichtung für Zellbiologie
Summary
Wir beschreiben ein Protokoll für die Mikrofabrikation der Gradienten-erzeugenden Mikrofluidik-Gerät, das räumliche und zeitliche Verläufe in klar definierten Mikroumgebung erzeugen können. Bei diesem Ansatz kann der Gradient-Erzeugung mikrofluidischen Gerät verwendet, um gerichtete Wanderung, Embryogenese, Wundheilung und Krebs Metastasen zu untersuchen.
Abstract
Die Herstellung und den Betrieb eines Gradienten-erzeugenden Mikrofluidikvorrichtung zur Untersuchung zellulärer Verhalten beschrieben wird. Ein mikrofluidischen Plattform ist ein günstiges experimentelles Werkzeug, weil es genau manipulieren kann Flüssigkeit fließt, ermöglichen einen hohen Durchsatz Experimente und generieren stabile lösliche Konzentrationsgradienten. Im Vergleich zu herkömmlichen Gradienten-Generatoren, Poly (dimethylsiloxan) (PDMS)-basierten mikrofluidischen Bauteilen erzeugen können stabile Konzentrationsgradienten von Wachstumsfaktoren mit gut definierten Profile. Hier haben wir einfache Gradienten-erzeugenden mikrofluidischen Systemen mit drei separaten Eingängen. Drei Mikrokanäle in einem Mikrokanal kombiniert werden, um Konzentrationsgradienten zu erzeugen. Die Stabilität und Form der Wachstumsfaktor-Gradienten wurden durch Fluorescein isothyiocyanate (FITC)-Dextran mit einem Molekulargewicht ähnlich epidermal growth factor (EGF) bestätigt. Mit dieser Mikrofluidikvorrichtung haben wir gezeigt, dass Fibroblasten ausgesetzt Konzentrationsgradienten der EGF zu höheren Konzentrationen migriert. Die Richtungsorientierung der Zellwanderung und die Beweglichkeit der wandernden Zellen wurden quantitativ durch Zell-Tracking-Analyse beurteilt. So könnte dieses Gefälle generierenden Mikrofluidikvorrichtung nützlich sein für das Studium und die Analyse des Verhaltens von wandernden Zellen.
Protocol
Discussion
Cells um stabile Konzentrationsgradienten der EGF in einer mikrofluidischen Vorrichtung zu höheren Konzentrationen migriert ausgesetzt. Die Richtungsorientierung der Zellmigration, chemotaktische Index, Motilität wandernden Zellen wurden durch Zell-Tracking-Analyse untersucht. Daher könnte dieses Gefälle generierenden mikrofluidischen Plattform nützlich sein Studium Krebsmetastasen, Embryogenese und Axon Führung.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dextran-FITC | Reagent | Sigma Aldrich | FD10S | Fluorescein isothiocyanate (FITC) conjugated-dextran (10kD) |
| hr-EGF | Invitrogen | 13247-051 | human recombinant Epidermal growth factor | |
| PDMS | K.R. Anderson Co. Inc. | 2065622 | Poly(dimethylsiloxane) (PDMS), Dow Corning Sylgard 184 (8.6 lb) | |
| Negative photoresist | Microchem | SU-8 50 | ||
| Si wafer | silicone wafer, 4 inch | |||
| Petri dishes | ||||
| Polyethylene tubing | Becton Dickinon | PE 20 | ||
| PBS | Invitrogen | |||
| Fibronectin | ||||
| NIH 3T3 | cell-line | fibroblast cells | ||
| Inverted microscope | Nikon | TE 2000 |
References
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