C57BL/6Jマウスにおける間質細胞と癌細胞の乳腺移植
Summary
このレポートでは、我々はマウス乳腺から分離し、培養ドナー細胞にシステムのデモンストレーションを、と同所間質分析するためにレシピエントマウスにこれらの細胞を移植：乳腺腫瘍の開発中に上皮との相互作用を。
Abstract
乳腺腫瘍の進行に対する線維芽細胞を含む間質細胞の影響はよくマウスの乳腺の間質細胞と上皮細胞の移植による、特に、マウスモデルを使用して文書化されています。現在の移植モデルは、しばしば間質細胞と上皮細胞の異なる遺伝的背景に起因する免疫不全マウスの使用を必要とする。細胞外マトリックスは、しばしば一貫性のある細胞間相互作用の2つの異なった種類の細胞を埋め込むために使用されるが、免疫原性基質であるマトリゲルまたはラット尾のコラーゲンの使用を必要としている。免疫不全マウスから機能的なT細胞の欠如は、医薬品開発と有効性に関する重要な意味を持つ、 生体内での乳腺腫瘍の進行に間質細胞の正確な評価を防ぎます。また、免疫不全マウスでは、特別なケアの条件を繁殖し、必要とするのは難しい、コストがかかります。これらの障害を克服するために、我々は、同所一貫性のある腫瘍の形成を誘導するために、同じ遺伝的背景からマウスに間質細胞と上皮細胞を移植する手法を開発しました。このシステムは、ドナーC57BL/6Jマウスから通常、癌関連線維芽細胞、PyVmT乳癌細胞とコラーゲンを収穫伴います。次に、細胞をコラーゲンに埋め込まれ、雌のC57BL/6Jマウスの鼠径部乳腺に移植されています。単独でPyVmT細胞の移植は、明白な腫瘍の30〜40日後に移植を形成する。 60日でのエンドポイント解析は、その線維芽細胞との共移植が単独で移植PyVmT細胞と比較して乳腺腫瘍の成長を促進することを示します。 C57BL/6Jマウス由来の細胞とマトリックスはこれらの研究で用いていたが、細胞とマトリックスと移植のアプローチの分離は、汎用性を実証するさまざまな遺伝的背景からマウスの方に適用されることがあります。要約すると、このシステムは、間質細胞と上皮細胞間の分子間相互作用を調査するために使用すること、および免疫不全マウスモデルでの重要な限界を克服しています。
Protocol
1。 C57BL/6Jマウスから分離し、ドナーのコラーゲンの抽出承認さIACUCの方法を使用して成熟した正常な雌C57BL/6Jマウスを生け贄に捧げる。 尾を回収し、組織を滅菌するために45分間70％エタノールに浸漬。ティッシュペーパー、アルミホイルでラップと尾を乾かします。必要になるまで-20℃で尾を保管してください。 そのような層流フードのような無菌環境で尾を置きます…
Discussion
腫瘍の進行における線維芽細胞の機能的な貢献は、癌関連した線維芽細胞が増加した腫瘍の増殖と浸潤5の良性乳腺上皮細胞の結果と同じ場所に移植した、移植モデルによって実証されている。従来の移植のアプローチは、異なる遺伝的マウスの背景や異なる種からの共移植間質および上皮細胞のSCIDまたはヌードマウスの使用が関与している。免疫不全マウスでは腫瘍特異的抗原と腫…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
このプロジェクトは、NIH / NCIの助成金番号R00 CA127357とカンザスがんセンター基金の大学を通じて資金を供給された。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| C57BL/6N mice | Harlan | N/A | |
| MMTV-PyVmT transgenic mice | Jackson laboratories | 002374 | |
| Fetal Bovine Serum | Fisher | SH3039603PR | |
| DMEM | VWR | 10000113873 | |
| Penicillin/streptomycin | Fisher | MT-30-001 | |
| amphotericin | fisher | BP2645-20 | |
| Amicon filtration columns ultracel 50k | Millipore | UFC905008 | |
| Tubes for Beckman TI rotor | Beckman | 355618 | |
| Rat tail collagen | Fisher | CB 40236 | |
| 10x EBSS | Sigma Aldrich | E7510-100ML | |
| Trypsin 1X, 0.25% in HBSS w/o Calcium and Magnesium | Fisher | MT-25-050-CI | |
| Glacial acetic acid | Fisher | A491-212 | |
| Coomasie blue | Fisher | BP101 25 | |
| Trypsin | Sigma Aldrich | T3924-100ml | |
| Collagenase A | Sigma AldrichC0130-50 | ||
| hyalronidase | Sigma Aldrich | H3884 | |
| DNase | Sigma Aldrich | D5025 | |
| Kaleidoscope Protein standard | Biorad | 1610375 | |
| Glass slides | Fisher | 12545-78 | |
| Glass coverslips | VWR | 101400-042 | |
| Vimentin antibody S-20 | Santa Cruz Biotechnology | SC-7558 | |
| α-smooth muscle actin antibody | Abcam | ab5694 | |
| CK14 antibody | Santa Cruz Biotechnology | sc-53253 | |
| CK18 antibody | Abcam | ab668 | |
| DAPI | Sigma Aldrich | D9542 | |
| Anti-mouse biotinylated | Vector laboratories | BA9200 | Distributed through Fisher |
| Anti-mouse-alexa-568 | Invitrogen | A10037 | |
| Anti-mouse- alexa-488 | Invitrogen | A11001 | |
| Streptavidin- alexa-488 | Invitrogen | S11226 | |
| DAPI | Invitrogen | D21490 | |
| Prolong antifade | Invitrogen | P-36930 | |
| Surgical scissors | Fine Science Tools | 91400-12 | |
| Fine spring scissors | Fine Science Tools | 15000-02 | |
| Blunt forceps | Fine Science Tools | 11002-12 | |
| # 5 fine forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | |
| Gut chromic suture | Fisher | NC9326254 | |
| Glass Pasteur pipet | Fisher | 22-042-815 | |
| Ethanol | Fisher | A406P 4 | |
| betadine | fisher | NC9386574 | |
| Wound clips | Fisher | 12032-07 | |
| Wound staple | Fisher | 12031-07 |
References
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Cite This Article
Cheng, N., Lambert, D. L. Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice. J. Vis. Exp. (54), e2716, doi:10.3791/2716 (2011).