Мы опишем простой, быстрый способ получения 3D-ткани, как сфероиды и их потенциальное использование количественного различия в межклеточных взаимодействиях.
Исследование межклеточных сплоченности и клеточного субстрата адгезии исторически были выполнены на однослойной культуре приверженцем жестких носителях. Клетки в тканях, однако, как правило, заключенная в плотно упакованной массы тканей, при котором клетки создания интимной связи со многими почти соседями и компонентов внеклеточного матрикса. Соответственно, среда химические и физические силы испытывают клетки в 3D ткани принципиально иные, чем те испытывают клеток, выращенных в монослой культуры. Это было показано, что заметно влияние клеточной морфологии и сигнализации. Несколько методов было разработано для создания 3D-культур клеток, включая инкапсуляции клеток в коллаген гели 1 или в биоматериала лесов 2. Такие методы, в то время как полезные, не повторять интимных прямой межклеточной адгезии архитектуры находится в нормальных тканях. Скорее, они больше приближены системы культуры, в которой отдельные клетки слабо диспергированы в 3D-сети из продуктов ECM. Здесь мы опишем простой метод, при котором клетки помещаются в висячей капли культуры и инкубировали в физиологических условиях, пока они не образуют истинные 3D сфероидов, в которой клетки находятся в непосредственном контакте друг с другом и с компонентов внеклеточного матрикса. Метод не требует специального оборудования и может быть адаптирован для включения добавления каких-либо биологического агента в очень малых количествах, которые могут представлять интерес для выяснения влияния на межклеточной или клеточной ECM взаимодействия. Метод может быть также использована для совместного культуры двух (или более) различных клеточных популяций, чтобы выяснить роль межклеточных или клеточно-ECM взаимодействий в определении пространственных отношений между ячейками. Cell-ячейки сплоченности и клеточной адгезии ECM являются краеугольным камнем исследования эмбрионального развития, опухоли стромальных клеток взаимодействия в злокачественные вторжения, заживление ран, а также для приложений к тканевой инженерии. Этот простой метод обеспечит средство получения ткани, как сотовые заполнители для измерения биомеханических свойств или молекулярные и биохимические анализы в физиологически соответствующие модели.
Исследования показали, что культивирование клеток в трехмерном контексте (3D) производит различные клеточной морфологии и сигнализации по сравнению с жесткой двумерной (2D) системе культуры 9. Например, фибробластов населенных гели коллагена показывают, что фибробласты морфологи?…
The authors have nothing to disclose.
Автор хотел бы поблагодарить д-ра Dongxuan Цзя для оказания технической помощи. Некоторые из изображений, входящих в этой статье, были в сотрудничестве с доктором Малкольмом С. Штейнберг, кафедра молекулярной биологии Принстонского университета. Автор также хотел бы поблагодарить Министерство обороны рака простаты Программа исследований (гранты PC-030 482 и PC-991 552) и NCI / NIH (грант R01CA118755) за их щедрую поддержку.