마우스의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 중간 대뇌 동맥 Intraluminal 폐색 (MCAO) 모델
Summary
intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO) 모델은 실험 허혈성 뇌졸중 모델 중 가장 자주 사용되는 모델입니다. 여기서 우리는 전체 레이저 도플러 flowmetry의 가이드와 함께 상세하게 모델 및 대표 결과를 보여줄 것입니다.
Abstract
스트로크 2009 1,2 년 미국에서 근처 70,000,000,000달러의 예상 비용, 죽음의 세 번째 주요 원인과 세계에서 장애의 주요 원인이다. intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO) 모델 쥐에 impactful 인간의 병리 현상을 시뮬레이션하기 위해 1986 년 고이즈미 사에 의해 개발되었습니다. MCAO 방식의 수정은 나중에 롱가 3 수여되었다. 두 기술은 널리 허혈성 뇌졸중 및 잠재적인 치료 modalities 5로 인한 뇌 손상의 분자 메커니즘을 식별하는 데 사용되었습니다. 쥐이 비교적 비침 투 방법은 유전자 변형과 녹아웃의 변종 6,7을 활용하는 마우스에 사용하도록 확장되었습니다. 모델 초점 대뇌 국소 빈혈하려면, intraluminal 봉합은 MCA의 기반을 막다하기 위해 내부 경동맥을 통해 고급입니다. 지정된 기간 후에 Retracting 봉합사는 자연 reperfusion을 모방한 것이었지만, 봉합도 영구적으로 유지하실 수 있습니다. 이 동영상은 stepwise 방식의 생쥐에 intraluminal MCAO 절차를 수행하기위한 두 가지 주요 접근 방식을 보여주는,뿐만 아니라 잠재적인 단점과 함정에 대한 통찰력을 제공합니다. 허혈성 뇌 조직은 이후 대뇌 경색 8 정도를 평가하는 2,3,5 – triphenyltetrazolium 염화물 (TTC)로 물들일 것이다.
Protocol
이 프로토콜은 기관 애니멀 케어 승인 및 플로리다 대학에서위원회 (IACUC)를 사용하고 "연구소 동물 관리의 원리"(NIH 간행물 번호 86-23, 1985 개정) 준수가되었습니다. 1. 자료 동물 : 수술 시에 20-26그램 무게 남성 C57BL / 6 마우스 (할렌 연구소, 인디애나 폴리스, IN, 미국). 마취 : 마취 기계 : VetEquip의 흡입 마취 시스템 (VetEquip 주식 회사, 플레즌턴…
Discussion
MCAO 모델은 murine 종의 대뇌 국소 빈혈을 복제 설립 모델입니다. 이 모델은 처음 쥐에 사용하고 이후 마우스에 적응했다. 혈액 뇌 장벽의 투자율과 intracranial 압력에 대한 수술 조작의 영향을 제거하는 craniectomy을 방지하는 것이이 기술의 장점입니다. 그러나, 이러한 스트레인과 관련된 차이가 10, 폐색 6, 체온 12, 마취 13 봉합 팁 11 기간의 크기 및 기타 요인?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of the reagent | Type | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|---|
| Male C57BL/6 mice | Animal | Harlan Laboratories, Indianapolis, IN, USA | 20-26 grs | |
| Dissection microscope | Microscope | Leica stereo Microscope MZ6 | 6.3:1 zoom | |
| Fiber optic illuminator | Illuminator | TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA | FO1–150 | |
| Isoflurane | Anesthesia | Baxter Pharmaceutics, Deerfield, IL | 1001936060 | |
| SuperCut Iris scissor, straight | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 14218 | |
| Vannas micro-scissor, straight | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 14003 | |
| Dumont fine tip forceps | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 503290 | |
| Vessel clip | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 14120 | |
| High Frequency Desiccator 900 | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 500397 | |
| 7-0 surgical Nylon monofilament suture | Suture | Ethicon, Inc., Somerville, NJ, USA | 1647G | Suture for occlusion |
| 7-0 surgical Silk suture | Suture | Ethicon, Inc., Somerville, NJ, USA | 7733G | Suture for ligation |
| Silicone RTV adhesive | Silicone rubber | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 1571 | |
| Vetbond | Tissue adhesive | 3M Company, St Paul, MN, USA | 70200746587 | |
| Puralube Vet Ointment | Eye ointment | Pharmaderm, Melville, NY, USA | ||
| Buprenorphine hydrochlorode | Analgesics | Hospira Inc., Lake Forest, IL, USA | NDC 0409-2012-32 | |
| Thermal Cautery Unit | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 501292 | ||
| PeriFlux System 5000 | TCD flowmetry | Perimed, Stockholm, Sweeden | ||
| BAT-12 | Rectal thermometer | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | BAT-12R | |
| T/PUMP, TP600 | Thermal blanket | Gaymar, NY, USA | ||
| 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride | Reagent | Sigma-Aldrich Co., St Louis, MO, USA | T8877 | |
| Mice brain matrix slicer | Brain slicer | Zivic-Miller Lab., Inc., Allison Park, PA, USA | BSMAS001-1 |
References
- . Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders. Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 1407-1431 (1989).
- Lloyd-Jones, D. Heart disease and stroke statistics–2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation. 119, e21-e181 (2009).
- Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 84-91 (1989).
- Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. Experimental studies of ischemic brain edema. I. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area. Jpn J Stroke. 8, 1-8 (1986).
- Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse. Neurol Res. 19, 641-648 (1997).
- Fujii, M. Strain-related differences in susceptibility to transient forebrain ischemia in SV-129 and C57black/6 mice. . Stroke; a journal of cerebral circulation. 28, 1805-1810 (1997).
- Bederson, J. B. Evaluation of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rats. Stroke; a journal of cerebral circulation. 17, 1304-1308 (1986).
- Qi, X., Hosoi, T., Okuma, Y., Kaneko, M., Nomura, Y. Sodium 4-phenylbutyrate protects against cerebral ischemic injury. Mol Pharmacol. 66, 899-908 (2004).
- Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy. J Cereb Blood Flow Metab. 13, 683-692 (1993).
- Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. Ideal suture diameter is critical for consistent middle cerebral artery occlusion in mice. Neurosurgery. 56, 196-200 (2005).
- Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes. Stroke; a journal of cerebral circulation. 35, 1720-1725 (2004).
- Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism?. Neuroreport. 13, 1431-1435 (2002).
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Cite This Article
Ansari, S., Azari, H., McConnell, D. J., Afzal, A., Mocco, J. Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice. J. Vis. Exp. (51), e2879, doi:10.3791/2879 (2011).