La aplicación de la Permanente Ligadura arteria cerebral media en el ratón
Summary
La arteria cerebral media (MCA) ligadura es una técnica para estudiar la isquemia cerebral focal en modelos animales. En este método, la arteria cerebral media se expone mediante craneotomía y se liga con cauterización. Este método da volumen del infarto altamente reproducible y el aumento de post-operatorio las tasas de supervivencia en comparación con otros métodos disponibles.
Abstract
Isquemia cerebral focal se encuentra entre el tipo más común de accidente cerebrovascular en los pacientes. Debido a la importancia clínica no ha habido un esfuerzo prolongado para desarrollar modelos animales para estudiar los acontecimientos que se desarrollan durante la lesión isquémica. Estas técnicas incluyen transitoria o permanente, los modelos de isquemia focal o global con muchos diferentes modelos animales, con los roedores más comunes son.
El método permanente MCA ligadura que también se conoce como pMCAo en la literatura se utiliza ampliamente como un modelo de isquemia focal en los roedores 1-6. Este método fue descrito originalmente para las ratas por Tamura et al. en 1981 7. En este protocolo se utilizó una craneotomía para acceder a la MCA y de las regiones proximal se ocluye por electrocoagulación. Los infartos a regiones corticales y sobre todo del estriado a veces dependiendo de la localización de la oclusión. Esta técnica está bien establecido y utilizado en muchos laboratorios de 8.13. El uso precoz de esta técnica condujo a la definición y descripción del "núcleo del infarto" y "penumbra", 14-16, y es a menudo utilizado para evaluar el potencial de compuestos neuroprotectores 10, 12, 13, 17. Aunque los estudios iniciales se realizaron en ratas, la ligadura permanente MCA ha sido utilizado con éxito en ratones con ligeras modificaciones, 18-20.
Este modelo produce infartos reproducible y el aumento de las tasas de supervivencia después. Aproximadamente el 80% de los accidentes cerebrovasculares isquémicos en los humanos ocurren en el área de MCA 21 y por lo tanto este es un modelo muy importante para los estudios de tiempos. En la actualidad, hay una escasez de tratamientos eficaces para los pacientes con ictus, y por lo tanto hay una necesidad de un buen modelo para evaluar el potencial compuestos farmacológicos y evaluar los resultados fisiológicos. Este método también puede ser utilizado para el estudio de los mecanismos de respuesta a la hipoxia intracelular in vivo.
A continuación, presentamos la cirugía de ligadura de MCA en un ratón C57/BL6. Se describe la preparación pre-quirúrgica, la cirugía de ligadura de MCA y 2,3,5 cloruro de trifenil tetrazolio (TTC) tinción para la cuantificación de los volúmenes de infarto.
Protocol
Discussion
El método permanente MCA ligadura da volumen del infarto altamente reproducible y el aumento de post-operatorio las tasas de supervivencia en comparación con otros métodos disponibles. La facilidad y la corta duración (~ 30 min) del procedimiento que sea aún más práctico. El método es ampliamente utilizado tanto en ratones y ratas.
Esta técnica requiere una cirugía invasiva bajo un microscopio estereoscópico. Por lo tanto, la experiencia en la operación bajo el microscopio y el p…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
La técnica quirúrgica fue adquirido originalmente en el laboratorio del doctor William D. Hill, en el Colegio Médico de Georgia. Los autores también desean agradecer al Dr. David A. Rempe y Prifti Landa para el uso de la cámara de disección. Esta investigación fue financiada por el NIH NS041744, NS051279, NS064700 F31 y 30815697D AHA.
Materials
| NAME | COMPANY AND CATALOGUE NUMBER |
|---|---|
| A. Solutions and Chemicals | |
| Povidone-Iodine Solution, Surgical Scrub | Aplicare, 82-209 |
| 70% Ethanol | Koptec, V1001 |
| 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) | Sigma, T8877 |
| 4% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences, 159SP |
| Phosphate Buffered Saline, pH:7.4 | Made and sterilized in the lab. |
| Mineral Oil | PML Microbiologicals, R6570 |
| Isofluorane | The Butler Company, 029405 |
| Buprenorphine (0.3mg/ml) | Hospira, NDC 0409-2012-32 |
| Artificial tears | The Butler Company, 007312 |
| Recovery Gel | Clear H2O, 72-01-5022 |
| B. Surgical Materials and Equipment | |
| C57/BL6 mouse, 10-12 weeks old | The colony was bred in the university vivarium |
| 100% oxygen tank | Airgas |
| Anesthetic Vaporizer and Flow meter | Surgivet, Model 100 |
| Heating Pad with Rectal Probe | Fine Science Tools, TR200 |
| Dissecting microscope | Zeiss, Stemi 2000 |
| Heating panel | Petco Services Ltd. 0307-013 |
| Small Vessel Cauterizer Set | Fine Science Tools, 18000-00 |
| Mini Peristaltic Pump | Harvard Apparatus, MPII |
| 1ml syringe | BD, 329650 |
| 18G needle | Becton Dickinson, 305196 |
| Surgical 5.0 Nylon Suture | Ethilon, 698H |
| Sectioning Block | Kent Scientific, 1mm |
| Single Edge Razor Blades | Electron Microscopy Sciences, 71962 |
| Label Tape | Scienceware, Bel-art Products F13463-2075 |
| Gauze Sponges | Kendall Curity 2252, Johnson and Johnson 6415 |
| Cotton Tip Applicators | Puritan 806-WCL |
| C. Surgery Tools | |
| Surgical Spring Scissors | Fine Science Tools 15003-08 |
| Microdissecting forceps angled | Fine Science Tools 5/45 |
| Microdissecting forceps curved | Fine Science Tools 5 Ti |
| Fine straight scissors | Fine Science Tools 14568-12 |
| Curved bone rongeur | Fine Science Tools 16021-14 |
| Hartman Hemostat Curved | Fine Science Tools 13003-10 |
Table 1. The list of materials, tools and chemicals used for the MCA ligation procedure. A. Solutions and Chemicals, B. Surgical Materials and Equipment, C. Surgery Tools.
References
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