השתלת מבשר עצבית היא אסטרטגיה מבטיח הגנה ו / או החלפת אבוד / נוירונים מתפקדת צוואר הרחם מנוע הסרעפת של פגיעה בחוט השדרה (SCI) לבין הנוירון המוטורי הפרעה, amyotrophic laterals טרשת (ALS). אנו מספקים פרוטוקול למסירה התא בחוט השדרה הצווארי קרן הגחון במודלים של מכרסמים ALS ו SCI.
פשרה הנשימה עקב אובדן הסרעפת הנוירון המוטורי היא תוצאה מתישה של חלק גדול של פגיעה בחוט השדרה טראומטי האנושית (SCI) במקרים 1 ו – הוא הגורם האולטימטיבי של מוות בחולים עם הנוירון המוטורי הפרעה, amyotrophic laterals טרשת (ALS) 2.
ALS היא מחלה נוירולוגית קטלנית אשר מאופיין ניוון מהיר יחסית של העליון הנוירונים המנוע נמוך יותר. חולים להיכנע בסופו של דבר המחלה על 2-5 שנים בממוצע לאחר האבחון בגלל שיתוק נשימתי כתוצאה מאובדן innnervation הנוירון המוטורי של הסרעפת הסרעפת 3. הרוב המכריע של המקרים הם ספורדיים, ואילו 10% הם של הטופס משפחתית. כעשרים אחוזים ממקרי משפחתית מקושרים מוטציות נקודתיות שונות בגן Cu / Zn superoxide dismutase 1 (SOD1) על כרומוזום 21 4. העכברים הטרנסגניים 4,5 ו – 6 חולדות נושאת מוטציה SOD1 האנושי גנים (G93A, G37R, G86R, G85R) נוצרו, ולמרות קיומם של מודלים של בעלי חיים אחרים של אובדן הנוירון המוטורי, כרגע המודלים הנפוצים ביותר של המחלה .
פגיעה בחוט השדרה (SCI) היא קבוצה הטרוגנית של מצבים כתוצאה מטראומה פיזית חוט השדרה, עם תוצאה תפקודית משתנה בהתאם למיקום סוג, וחומרת הפציעה 7. עם זאת, כמחצית האדם במקרים SCI להשפיע על אזורים צוואר הרחם, וכתוצאה מכך תפקוד הנשימה מתישה בשל אובדן מנוע הסרעפת נוירון ופגיעה יורד אקסונים bulbospinal הנשימה 1. מספר מודלים של בעלי חיים של SCI פותחו, עם הנפוצים ביותר ואת קלינית רלוונטית להיות contusion 8.
השתלה של מעמדות שונים של תאים עצביים מבשר (NPCs) היא אסטרטגיה טיפולית מבטיחה לטיפול פציעות CNS טראומטית ניוון מוחיים, כולל ה-ALS ו SCI, בגלל היכולת להחליף neuroprotection אבד או CNS מתפקדת סוגי תאים, מספקים, ולספק גורמים גן עניין 9.
מודלים בבעלי חיים של שני מחא ו SCI יכול מודל היבטים קליני רלוונטי רבים של מחלות אלו, לרבות הפסד הנוירון המוטורי הסרעפת פשרה בדרכי הנשימה עקב 10,11. כדי להעריך את היעילות של NPC מבוססי אסטרטגיות על תפקודי נשימה אלה במודלים של בעלי חיים מחא ו SCI, התערבויות הסלולר יש להפנות במיוחד אזורים המכילים טיפולית יעדים רלוונטיים, כגון נוירונים מנוע הסרעפת. אנו מספקים פרוטוקול מפורט להשתלה, רב סגמנטלי intraspinal של NPCs לתוך העניין חוט השדרה הצווארי הגחון אפור של מודלים ניווניות כגון SOD1 לעכברים וחולדות G93A, כמו גם חולדות חוט השדרה נפגע עכברים 11.
עבור מחקרים שכללו SOD1 לעכברים וחולדות G93A, גיל ומין להתאים את החיות בתוך קבוצה, ולהפיץ בעלי חיים בתוך החול אותו לקבוצות שונות. עדיף להשתמש בכל בעלי חיים ממין זהה בשני מחא ומודלים SCI כי תהליכי מחלה עשוי להיות שונה בין גברים לנשים, אך זה יכול להיות גם שימושי יש מספיק ?…
The authors have nothing to disclose.
אני רוצה להודות: לכל חברי Lepore, Maragakis ו רוטשטיין מעבדות לדיון מועיל; ותיקי משותק של אמריקה ח קרייג Neilsen קרן למימון.
Name of reagent | Company | Catalog number |
HBSS | Gibco | 14170 |
0.05% Trypsin | Gibco | 25300 |
Soybean Trypsin Inhibitor (optional) | Sigma | T-6522 |
Acepromazine maleate (0.7 mg/kg) | Fermenta Animal Health | |
Ketamine (95 mg/kg) | Fort Dodge Animal Health | |
Xylazine (10 mg/kg) | Bayer | |
#11 Feather surgical blade | Electron Microscopy Sciences | 72044-11 |
Cotton-tipped applicators (6 inch) | Fisher | 23-400-101 |
Rat-toothed forceps | Fine Science Tools | Rat: 11023-15; Mouse: 11042-08 |
Medium-sized spring scissors | Fine Science Tools | 15012-12 |
Mini spring scissors | Fine Science Tools | 15000-10 |
Rongeur | Fine Science Tools | Rat: 16121-14; Mouse: 16221-14 |
Microknife | Fine Science Tools | 10056-12 |
Needle holders | Fine Science Tools | 12502-14 |
Suture: 4-0 | Vicryl | S-183 |
Staples: 9 mm | Autoclip | 427631 |
Stapler: 9 mm (Reflex #203-1000) | World Precision Instruments | 5000344 |
Warm water pump (T/Pump) | Gaymar | P/N 07999-000 |
Cyclosporin A: 250.0 mg/5.0 mL ampules | Novartis/Sandimmune | NDC 0078-0109-01 |
FK-506 | LC Laboratories | F-4900 |
Rapamycin | LC Laboratories | R-5000 |
Injector | World Precision Instruments | UMP2 |
Micro 4 Microsyringe Pump Controller | World Precision Instruments | UMC4 |
Micromanipulator | World Precision Instruments | Kite-R |
10.0 μL Hamilton syringe | Hamilton | 80030 |
Hamilton needles: 33-gauge, 45° bevel, 1 inch | Hamilton | 7803-05 |
Glass 20.0 μL microcapillary pipettes (optional) | Kimble | 71900-20 |