Microfabricated بعد صفيف ، للكشف عن (mPADs) : نهج لعزل القوات الميكانيكية
Summary
في هذا الفيديو ، ونحن لشرح كيفية تصنيع واستخدام أجهزة الكشف عن مجموعة microfabricated آخر (mPADs) لتقييم التحويرات من انقباض الخلوية.
Abstract
في هذا الفيديو ، وسوف نقدم نهجنا لقياس قوى الشد الخلوية باستخدام مجموعة microfabricated الوظائف. يتم إنشاؤها من خلال جر القوات الميوسين أكتين – التفاعلات وتلعب دورا هاما في علم وظائف الأعضاء لدينا. خلال التنمية ، فإنها تمكن الخلايا للانتقال من مكان واحد لآخر من أجل تشكيل الهياكل في وقت مبكر من الأنسجة. قوات الجر مساعدة في عمليات الشفاء. كانت ضرورية لإقفال السليم للجروح أو الهجرة والزحف من الكريات البيضاء من خلال جسمنا. يمكن لهذه القوى نفسها أن تكون ضارة على صحتنا في حالة ورم خبيث أو نمو الأوعية الدموية السرطانية نحو الورم. كانت الطريقة الأكثر شيوعا التي يمكن من خلالها دراسة الخلايا في المختبر لاستخدام الزجاج أو صحن البوليسترين. ومع ذلك ، فإن صلابة من ركائز يجعل من المستحيل فعليا على قياس قوى الجر الخلية ، وهناك طرق قليلة نسبيا لدراسة قوى الجر. وقد وضعت مختبرنا تقنية للتغلب على هذه القيود. يستند هذا الأسلوب على مجموعة العمودي للالكابولي مرنة ، وصلابة ومقياس حجم وهي ان هذه الخلايا الفردية موزعة على العديد من الكابولي وصرف لهم في هذه العملية. الركائز التي نستخدمها هي 3 ميكرومتر في القطر ، و 10 ميكرون طويل القامة ، ويتم تكوينها في مجموعة منتظمة مع تباعد 9 الوسط إلى مركز ميكرون. ولكن يمكن أن تكون هذه الأبعاد المادية المتنوعة بسهولة لاستيعاب مجموعة متنوعة من الدراسات. نبدأ مع رئيسي السيليكون ، ولكن يتم إجراء الوظائف النهائي من المطاط والسيليكون يسمى بولي (ميثيل siloxane) ، أو PDMS. يمكننا قياس الانحرافات تحت المجهر وحساب حجم واتجاه قوى الجر اللازمة لإنتاج الانحرافات الملاحظة. نحن ندعو هذه ركائز microfabricated بعد الصفيف كاشفات ، أو mPADs. هنا ، سوف نظهر لكم كيف نبتدع واستخدام mPADs لتقييم التحويرات من انقباض الخلوية.
Protocol
References
- Tan, J. L., Tien, J., Pirone, D., Gray, D. S., Chen, C. S. Cells lying on a bed of microneedles: An approach to isolate mechanical force. Proc Nat Acad Sci USA. 100, 1484-1489 (2003).
- Sniadecki, N. J., Chen, C. S., Wang, Y. L., Discher, D. E. Microfabricated Silicone Elastomeric Post Arrays for Measuring Traction Forces of Adherent Cells. Methods in Cell Biology – Cell Mechanics. 83, 313-328 (2007).
- Lemmon, C. A., Sniadecki, N. J., Ruiz, S. A., Tan, J. T., Romer, L. H., Chen, C. S. Shear Force at the Cell-Matrix Interface: Enhanced Analysis For Microfabricated Post Array Detectors. Mechanics & Chemistry of Biosystems. 2, 1-16 (2005).
