Humane pluripotent stamceller (hPSCs) har potensial til å behandle en myriade av ulike sykdommer. Nytten av disse cellene ligger i det faktum at de kan differensiere i hvilken som helst celletype i kroppen. Her beskriver vi teratom analysen, som brukes til å demonstrere pluripotence av hPSCs.
Pluripotent stamceller (PSCs) har den unike egenskap at de kan differensiere i celler fra alle tre bakterie lag. Dette gjør dem en potensielt verdifullt verktøy for behandling av mange forskjellige sykdommer. Med bruk av induserte pluripotent stamceller (iPSCs) og videre forskning med humane embryonale stamceller (hESCs) er det behov for analyser som kan påvise at en bestemt cellelinje er pluripotent. Germline overføring har vært gullstandarden for å demonstrere pluripotence av musen embryonale stamceller (mESC) linjer 1,2,3. Ved hjelp av denne analysen, kan forskerne viser at en mESC linje kan gjøre alle celletyper i embryoet inkludert kjønnsceller 4. Med generasjon av menneskelig ESC linjer 5,6, var den aktuelle analysen å bevise pluripotence av disse cellene uklar ettersom menneskelige ESCs ikke kan testes for germline overføring. Som en surrogat, blir teratom analysen dag brukes til å demonstrere pluripotsering av humane pluripotent stamceller (hPSCs) 7,8,9. Selv om denne analysen har nylig kommet i søkelyset, og nye teknologier blir aktivt utforsket, er det teratom analysen dagens gullstandard 7. I denne analysen, blir cellene aktuelle sprøytet inn en immun kompromittert mus. Hvis cellene er pluripotent, vil en teratom etter hvert utvikle og deler av svulsten vil vise vev fra alle 3 spiren lag 10. I teratom analysen, kan hPSCs injiseres i ulike områder av musen. De vanligste injeksjonssteder inkluderer testis kapselen, nyrene kapsel, leveren, eller i benet enten subkutant eller intramuskulært 11. Her beskriver vi en robust protokoll for generering av teratomer fra hPSCs bruker testis kapsel som sted for tumorvekst.
Metoden som presenteres her gir en svært pålitelig og ukomplisert måte å generere teratomer fra hPSCs i testikkelen kapselen. Det er flere kritiske parametere i denne teknikken. Spesielt er det viktig å injisere hPSC cellelinjer som er kjent for å være pluripotent som en kontroll. Andre viktige parametre er tidsintervallet mellom injeksjon og tumor observasjon. For cellelinjer som WA09, bør teratomer observeres i 6-8 uker. For nye iPSC linjer finner vi at ofte 10 uker er nødvendig. En annen bekymring er antall celler injisert. Vi injiserer en million celler, men analysen kan enkelt gjøres med færre celler. I tillegg er injeksjon middels viktig. Vi finner at vi får de beste resultatene når cellene blir injisert i en 1:1 blanding av matrigel og DMEM/F-12, i motsetning til PBS eller DMEM/F-12.
The authors have nothing to disclose.
Dette arbeidet ble finansiert av CIRM tilskudd # TR-1250, RT1-01108, og CL1-00502.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Accutase | Invitrogen | A1110501 |
DMEM/F-12 | Invitrogen | 113300-032 |
Matrigel | BD Biosciences | 354277 |