Человека плюрипотентных стволовых клеток (hPSCs) обладают потенциалом для лечения множества различных заболеваний. Полезность этих клеток заключается в том, что они могут дифференцироваться в любой тип клеток в организме. Здесь мы описываем тератома анализа, которые используются для демонстрации pluripotence из hPSCs.
Плюрипотентных стволовых клеток (ЭСК) имеют уникальные характеристики, что они могут дифференцироваться в клетки всех трех зародышевых листков. Это делает их потенциально ценный инструмент для лечения различных заболеваний. С появлением индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (иПСК) и продолжение исследований с человеческими эмбриональными стволовыми клетками (ЭСК) необходимо для анализов, которые могут продемонстрировать, что определенная линия клеток плюрипотентные. Половые передачи был золотой стандарт для демонстрации pluripotence из мышиных эмбриональных стволовых клеток (мЭСК) линии 1,2,3. С помощью этого анализа, исследователи могут показать, что мЭСК линия может сделать все типы клеток эмбриона в том числе половых клеток 4. При генерации линий ЭСК человека 5,6, соответствующего анализа, чтобы доказать pluripotence этих клеток было неясно, поскольку человеческие эмбриональные клетки не могут быть проверены на передачу зародышевой линии. Как суррогат, тератома анализа в настоящее время используется, чтобы продемонстрировать pluripotпрозрачность в человеческих плюрипотентных стволовых клеток (hPSCs) 7,8,9. Хотя этот анализ в последнее время объектом пристального внимания и новые технологии осваиваются, тератома анализа является текущим золотой стандарт 7. В данном анализе клеток в вопросе вводят в иммунной угрозу мыши. Если плюрипотентные клетки, тератомы, в конечном счете разработать и участки опухоли покажет тканей все 3 зародышевых листков 10. В тератома анализа, hPSCs может быть введен в различных областях мыши. Наиболее распространенные места инъекции включают капсулы яичка, почечную капсулу, печени, или в ногу подкожно или внутримышечно 11. Здесь мы опишем надежный протокол для создания тератомы с использованием hPSCs яичка капсулы в качестве площадки для роста опухоли.
Метод, представленные здесь обеспечивает высокую надежность, просто средством создания тератомы из hPSCs в яичках капсулы. Есть несколько важных параметров, в этой технике. В частности, важно, чтобы придать HPSC клеточных линий, которые, как известно, плюрипотентные в качестве контроля. Другие важные параметры включают в себя интервал времени между введением и опухолевых наблюдения. Для клеточных линий, как WA09, тератомы следует соблюдать в течение 6-8 недель. Для новых линий IPSC мы находим, что нередко в 10 недель не требуется. Еще одной проблемой является количество клеток вводят. Мы вводить один миллион клеток, но анализ можно легко сделать с меньшим количеством клеток. Кроме того, введение среднего важно. Мы считаем, что мы получим лучшие результаты, когда клетки вводятся в смеси 1:1 матригелем и DMEM/F-12, в отличие от ФСБ или DMEM/F-12.
The authors have nothing to disclose.
Эта работа финансировалась CIRM гранты # TR-1250, RT1-01108, и CL1-00502.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Accutase | Invitrogen | A1110501 |
DMEM/F-12 | Invitrogen | 113300-032 |
Matrigel | BD Biosciences | 354277 |