Humana pluripotenta stamceller hPSCs) har potential att behandla en mängd olika sjukdomar. Användbarheten av dessa celler ligger i det faktum att de kan differentiera till vilken celltyp som helst i kroppen. Här beskriver vi teratom-analys som användes för att demonstrera pluripotence av hPSCs.
Pluripotenta stamceller (PSC) har den unika egenskapen att de kan differentiera till celler från alla tre germinallager. Detta gör dem potentiellt värdefullt verktyg för behandling av många olika sjukdomar. Med tillkomsten av inducerade pluripotenta stamceller (iPSCs) och fortsätter forskning med humana embryonala stamceller (hESCs) finns det ett behov för analyser som kan visa att en viss cellinje är pluripotenta. Könsceller överföring har varit guldmyntfoten för att påvisa pluripotence av mus embryonala stamceller (Mesc) linjer 1,2,3. Med denna analys, kan forskarna visa att en Mesc linje kan göra alla celltyper i embryot, inklusive könsceller 4. Med genereringen av humant ESC linjer 5,6, var den lämpliga analysen för att visa pluripotence av dessa celler oklar eftersom humana ESC inte kan testas med avseende könsceller överföring. Som ett surrogat är teratom analysen för närvarande används för att demonstrera pluripottransparensen för mänskliga pluripotenta stamceller (hPSCs) 7,8,9. Även denna analys har nyligen kommit under kontroll och ny teknik är aktivt utforskas, är teratom analysen nuvarande guldmyntfoten 7. Vid denna analys är cellerna i fråga injiceras i en äventyrad immunfunktion mus. Om cellerna är pluripotenta, kommer en teratom utveckla slutligen och sektioner av tumören kommer att visa vävnader från alla 3 germinallager 10. I teratom analys kan hPSCs injiceras i olika områden av musen. De vanligaste injektionsställen innefattar testikel kapsel, njurkapseln, levern, eller in i benet antingen subkutant eller intramuskulärt 11. Här beskriver vi ett robust protokoll för generering av teratom från hPSCs med testiklarna kapseln som plats för tumörtillväxt.
Metoden som presenteras här ger en mycket pålitlig, enkla sättet att generera teratom från hPSCs i testiklarna kapseln. Det finns flera kritiska parametrar i denna teknik. I synnerhet är det viktigt att injicera hPSC cellinjer som är kända för att vara pluripotenta som en kontroll. Andra viktiga parametrar omfattar tidsintervallet mellan injektion och tumör observation. För cellinjer som WA09 bör teratom iakttas i 6-8 veckor. För nya IPSC linjer finner vi som ofta 10 veckor krävs. Ett annat bekymmer är antalet injicerade celler. Vi injicera en miljon celler men analysen kan lätt göras med färre celler. Dessutom är det injektionsmedium viktig. Vi finner att vi får de bästa resultaten när cellerna injiceras i en 1:1 blandning av Matrigel och DMEM/F-12, i motsats till PBS eller DMEM/F-12.
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete har finansierats av CIRM bidrag # TR-1250, RT1-01.108 och CL1-00.502.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Accutase | Invitrogen | A1110501 |
DMEM/F-12 | Invitrogen | 113300-032 |
Matrigel | BD Biosciences | 354277 |