图案的使用生物倒装芯片的胚胎干细胞
Summary
我们证明一个简单的方法，放置在基板上的细胞所需的位置。这种方法模式翻转含有一个硅芯片与基板上的细胞充满微孔的细胞。这种方法提供了一种新的方式来调节细胞之间的可传播的juxtacrine信号。
Abstract
在许多生物过程，如肿瘤的生长，干细胞的分化，干细胞的自我更新和扩散信号的细胞 – 细胞接触（juxtacrine信令）组成的细胞间的相互作用是重要的。目前的一些方法存在调节体外细胞信号。扩散信号调制总额的方法之一，是细胞种植密度，在文化的不同而有所差异。由于细胞种植，结果在实际的细胞与细胞间的间距和细胞 – 细胞接触的数量相当大的变化，并不能规定当地环境的随机性质。一个调节细胞信号的更具体的方法是使用分子抑制剂或基因的方法，打倒特定的信号蛋白，但是这两种方法是最适合操纵小分子。在这里，我们展示了一种新的方法来调节细胞 – 细胞信号调制在所需的位置放置在基板上不同的细胞群的细胞当地环境。这种方法提供了一种互补的方式来控制细胞之间的信号的地方可扩散和juxtacrine。我们的方法使使用的生物覆晶（BFC），一个微型硅芯片，含有微孔，每个大小数百到数千持有一个单一的单元格或小的数字。我们只需加载吹打到井阵列和洗衣机关闭阵列卸载细胞与细胞的芯片。该芯片然后翻转到基板上，使细胞的水井和基板上掉下来，维护他们的图案。细胞附着后，芯片可以被删除（或左）。这种细胞图案的方法是独特之处在于：1）不改变基板的化学成分，从而使细胞的增殖和迁移; 2）允许到任何基材上的图案，包括组织培养聚苯乙烯，玻璃，基质胶，和甚至馈线细胞层和3）是与传统的微接触印刷兼容，使创建与这些岛屿内放置的细胞外基质的岛屿。在这段视频中，我们表现出的图案的鼠标到组织培养聚苯乙烯胚胎干细胞BFC。
Protocol
Discussion
虽然这里显示的协议和视频描述BFCs使用BFC 1模式小鼠胚胎干细胞（mESCs），可用于几乎任何细胞类型的利益格局。唯一的变化可能需要改变大小的微孔。根据我们的经验，使用BFC的另一种类型的细胞，微孔直径和高度大于独立的单元直径10微米等于的单细胞模式效果最好。
BFCs也可以被使用到其他基板，包括其他细胞，格局细胞没有在协议中的重大变化。到现有的细胞层的图案是BFC方法比传统的细胞…
Acknowledgements
这项工作是由美国国立卫生研究院授予EB007278支持。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PDMS | Dw Corning | Sylgard 184 | ||
| Silicon master mould | ||||
| Tissue culture dishes | Falcon | 35-3001 | 35 mm | |
| 3/4″ binder clips | ||||
| PBS | ||||
| hexamethyldisiloxane | Shin-Etsu MicroSi | |||
| New Item | Microchem | SU8-2050 | ||
| PM acetate | ||||
| Isopropanol | ||||
| BSA | 7.5% Bovine Serum Albumin |
References
- Rosenthal, A., Macdonald, A., Voldman, J. Cell Patterning Chip for Controlling the Stem Cell Microenvironment. Biomaterials. 28, 3208-3216 (2007).
