الزخرفة من الخلايا الجذعية الجنينية باستخدام رقاقة بيو فليب
Summary
نحن يبرهن على وجود طريقة بسيطة لوضع الخلايا في الأماكن المطلوبة على ركيزة. هذا الأسلوب أنماط الخلايا بواسطة رقاقة السيليكون التقليب microwells تحتوي على خلايا مملوءة الركيزة. هذا الأسلوب يوفر طريقة جديدة لتعديل الإشارات وإنتشاري juxtacrine بين الخلايا.
Abstract
الخلايا التي تتكون من خلية التفاعلات يشير إنتشاري وخلية خلية الاتصال (إشارات juxtacrine) مهمة في العديد من العمليات البيولوجية ، مثل نمو الورم ، وتمايز الخلايا الجذعية ، والخلايا الجذعية الذاتية التجديد. وهناك عدد من الطرق الموجودة حاليا لتعديل إشارات الخلايا في المختبر. أسلوب واحد من المبلغ الإجمالي للتحوير الإشارة هو إنتشاري تختلف كثافة البذر الخلية خلال الثقافة. نظرا لطبيعة عشوائية من بذر الخلية ، وينتج عن هذا التفاوت الكبير في تباعد الخلية الخلية الفعلي وكمية من الخلايا خلية الاتصال ، ولا يمكن أن تفرض على البيئة المحلية. نهج أكثر تحديدا للإشارة الخلية تحوير لاستخدام مثبطات الجزيئية أو النهج الوراثية لاسقاط اشارة محددة البروتينات ، ولكن هي الأنسب كل من هذه الأساليب لمعالجة عدد قليل من الجزيئات. هنا ، ونحن يبرهن على وجود نهج جديد للإشارات الخلية خلية تحوير أن ينظم البيئة المحلية من مجموعة من الخلايا عن طريق وضع أرقام مختلفة من الخلايا في الأماكن المطلوبة على ركيزة. هذا الأسلوب يوفر وسيلة مكملة للتحكم في الإشارات المحلية وإنتشاري juxtacrine بين الخلايا. لدينا أسلوب يجعل من استخدام المعالج فليب بيو (BFC) ، رقاقة السيليكون microfabricated تحتوي على مئات إلى آلاف microwells ، كل عقد الحجم إما خلية واحدة أو عدد قليل من الخلايا. نحن مع تحميل رقاقة خلايا ببساطة عن طريق pipetting لهم على مجموعة من الآبار وغسل خلايا تفريغ قبالة الصفيف. ومن ثم انقلبت على الشريحة ركيزة ، حيث الخلايا تسقط من الآبار وعلى الركيزة ، والحفاظ على الزخرفة. بعد الخلايا قد تعلق ، يمكن إزالة الرقاقة (أو اليسار على). هذا النهج في الزخرفة الخلية هي فريدة من نوعها من حيث أنها : 1) لا يغير من كيمياء الركيزة ، وبالتالي السماح الخلايا على التكاثر والهجرة ؛ 2) يسمح الزخرفة على أي الركيزة ، بما في ذلك الأنسجة الثقافة البوليسترين والزجاج وmatrigel و المغذية حتى طبقات الخلية ؛ و 3) متوافق مع microcontact الطباعة التقليدية ، والسماح بإنشاء الجزر المصفوفة خارج الخلية مع الخلايا وضعها داخل تلك الجزر. في هذا الفيديو ، نبدي الزخرفة من الخلايا الجذعية الجنينية على الأنسجة الثقافة البوليسترين باستخدام BFC.
Protocol
Discussion
على الرغم من أن بروتوكول والفيديو يظهر هنا وصف باستخدام 1 BFC إلى الخلايا الجذعية الجنينية الماوس نمط (mESCs) ، يمكن أن تستخدم لنقش BFCs عمليا أي نوع من الخلايا في المصالح. تغيير واحد فقط قد تحتاج إلى إجراء تغيير في حجم microwells. في تجربتنا ، لاستخدام الخلايا BFC لنمط واحد من آخر نوع من …
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح EB007278.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PDMS | Dw Corning | Sylgard 184 | ||
| Silicon master mould | ||||
| Tissue culture dishes | Falcon | 35-3001 | 35 mm | |
| 3/4″ binder clips | ||||
| PBS | ||||
| hexamethyldisiloxane | Shin-Etsu MicroSi | |||
| New Item | Microchem | SU8-2050 | ||
| PM acetate | ||||
| Isopropanol | ||||
| BSA | 7.5% Bovine Serum Albumin |
References
- Rosenthal, A., Macdonald, A., Voldman, J. Cell Patterning Chip for Controlling the Stem Cell Microenvironment. Biomaterials. 28, 3208-3216 (2007).
