Padronização de Células-Tronco Embrionárias Usando o Chip Bio Virar
Summary
Demonstramos um método simples para colocar as células em locais desejados sobre um substrato. Este método padrões células lançando um chip de silicone contendo micropoços preenchidos com células na superfície do substrato. Este método oferece uma nova forma de modular a sinalização difusíveis e juxtacrine entre as células.
Abstract
Interações célula-célula consistindo de sinalização e difusíveis contato célula-célula (sinalização juxtacrine) são importantes em vários processos biológicos como o crescimento do tumor, a diferenciação de células-tronco, células-tronco e auto-renovação. Uma série de métodos existem atualmente para modular sinalização celular in vitro. Um método de modular a quantidade total de sinalização difusíveis é variar a densidade de semeadura de células durante a cultura. Devido à natureza aleatória de semeadura de células, isso resulta em uma considerável variação no espaçamento célula-real ea quantidade de contato célula-célula, e não pode prescrever o meio ambiente local. Uma abordagem mais específica para a sinalização celular modular é a utilização de inibidores moleculares ou abordagens genéticas para derrubar proteínas específicas de sinalização, mas ambos os métodos são mais adequados para a manipulação de um pequeno número de moléculas. Aqui, nós demonstramos uma nova abordagem para sinalização célula-célula de modulação que modula o meio ambiente local de um aglomerado de células, colocando números diferentes de células nos locais desejados sobre um substrato. Este método oferece uma forma complementar para controlar a sinalização local difusíveis e juxtacrine entre as células. Nosso método faz uso do Chip Bio Flip (BFC), um chip de silicone microfabricated contendo centenas-de-milhares de micropoços, cada tamanho para segurar ou uma única célula ou um pequeno número de células. Nós carregar o chip com células simplesmente pipetando-los para a matriz de poços e lavar as células descarregado fora do array. O chip é então colocado sobre um substrato, no qual as células saem dos poços e na superfície do substrato, mantendo a sua padronização. Depois que as células têm ligado, o chip pode ser removido (ou deixadas por diante). Esta abordagem para padronização celular é o único que: 1) não altera a química do substrato, permitindo assim que as células a proliferar e migrar; 2) permite modelar em qualquer substrato, incluindo da cultura de tecidos de isopor, vidro, Matrigel, e mesmo alimentador de camadas de células, e 3) é compatível com a impressão microcontact tradicional, permitindo a criação de ilhas de matriz extracelular com células colocadas dentro dessas ilhas. Neste vídeo, demonstramos a padronização de células-tronco embrionárias de camundongos em cultura de tecidos de poliestireno utilizando o BFC.
Protocol
Discussion
Embora o protocolo e vídeo mostrado aqui descrevem como usar o BFC um padrão de células-tronco embrionárias de rato (mESCs), BFCs pode ser usado para padrão de praticamente qualquer tipo de célula de interesse. A única mudança pode-se precisar fazer é alterar o tamanho das microcavidades. Em nossa experiência, para usar o BFC às células padrão único de outro tipo de célula, um diâmetro de micropoços e altura igual a 10 microns maior que o diâmetro das células unattached funciona melhor.
BFCs também pod…
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado pelo NIH conceder EB007278.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PDMS | Dw Corning | Sylgard 184 | ||
| Silicon master mould | ||||
| Tissue culture dishes | Falcon | 35-3001 | 35 mm | |
| 3/4″ binder clips | ||||
| PBS | ||||
| hexamethyldisiloxane | Shin-Etsu MicroSi | |||
| New Item | Microchem | SU8-2050 | ||
| PM acetate | ||||
| Isopropanol | ||||
| BSA | 7.5% Bovine Serum Albumin |
References
- Rosenthal, A., Macdonald, A., Voldman, J. Cell Patterning Chip for Controlling the Stem Cell Microenvironment. Biomaterials. 28, 3208-3216 (2007).
