寄生蜂简介<em>果蝇</em>和Antiparasite的免疫反应的
Summary
寄生蜂（寄生）构成了许多昆虫的天敌，包括各大类<em>果蝇</em>。我们将引进的技术，这些寄生虫传播<em>果蝇</em>属。并演示如何分析免疫组织的影响<em>果蝇</em>幼虫。
Abstract
最知名的寄生蜂攻击的果蝇幼虫或蛹的阶段。虽然Trichopria果蝇感染主机（ 图1A-C的 ），蛹的阶段，女性的，属Leptopilina（ 图1D，1F，1G）和Ganaspis（ 图1E）攻击的幼虫。我们使用这些寄生虫，一个种族的生物武器研究的分子基础。寄生蜂有防菌的巨大价值。他们大多携带的毒力和其他因素，修改主机的生理和免疫力。分析果蝇黄蜂提供特定物种的相互作用如何塑造自然群落的遗传结构的见解。这些研究还为了解主机的免疫生理以及如何协调免疫反应，这一类寄生虫挫败模型。
幼虫/蛹的表皮，作为第一线的夏德芬SE。蜂产卵器是一个尖锐的针状结构，可有效提供主机hemocoel的鸡蛋。其次是在表皮伤口愈合反应（ 图1C，箭头）产卵。有些黄蜂可以插入同一台主机上的两个或两个以上的鸡蛋，虽然只有一个鸡蛋的开发成功。的编外鸡蛋或发展幼虫被淘汰一个尚未了解的过程。这些小蜂，因此被称为为孤寄生。
根据动态应变和蜂种，蜂卵有两种命运。它可以封装，以便其发展受阻（主机出现; 图2左）;或黄蜂卵孵化，开发，molts，生长到成年（黄蜂出现图2右）。L。 heterotoma是果蝇寄生蜂的最好研究的物种之一。这是一个“多面手”，这意味着它可以利用大多数果蝇小号的pecies作为主机1 与heterotoma和L。 victoriae是姐妹物种和它们产生的病毒样颗粒封装响应2，积极干预。与L。 heterotoma，L. boulardi是一个专业的寄生虫和果蝇的范围，它采用的是相对有限的1。株L。 boulardi也产生病毒样颗粒3，虽然他们在自己的能力成功地在 D显着不同黑 1。一些这些研究boulardi株是很难成长， 在 D动态主机1 果蝇作为经常成功地封装它们的卵。因此，重要的是要在特定的实验协议双方的合作伙伴的知识。
此外屏障组织（角质层，肠道和气管）， 果蝇幼虫有全身的细胞免疫和体液免疫反应，产生fROM功能的血细胞和脂肪体，分别。产卵由L. boulardi同时激活免疫武器1,4。流通中的血细胞被发现，在柄的人群，分段角质层下和淋巴腺。淋巴腺是一个小的背侧幼虫的造血器官。造血干细胞群，称为叶，成对排列分段沿背船只沿着动物的前后轴（ 图3A）运行。脂肪体是一个大型的多功能器官（ 图3B）。它分泌抗菌肽微生物和后生动物感染。
黄蜂感染激活免疫信号（ 图4）4。在细胞水平上，它触发的血细胞的分裂和分化。在自卫，聚集和胶囊开发感染动物hemocoel（ 图5）5,6。 ACtivated血细胞迁移向蜂卵（或黄蜂幼虫）和它周围开始形成一个胶囊（ 图5A – F）。一些血细胞聚集形成结节（ 图5G – H）。仔细分析发现，黄蜂感染引起淋巴腺叶最前，在其外围分散（ 图6C，D）的。
我们提出用电话信号转导通路元件背和Spätzle（ 图4,5,7），其目标Drosomycin（ 图6）具有代表性的数据，来说明如何在淋巴腺和hemocoel的具体变化，可以研究黄蜂感染后。这里描述的剥离协议，也能产生从主机淋巴黄蜂（ 图8）鸡蛋（或发展的黄蜂阶段）。
Protocol
Discussion
在对果蝇的寄生蜂的兴趣正在涌动解码整个基因组的分子生物学技术成为高效率和成本效益。然而，相对于他们非常出色的研究主机，蜂生物学的许多有趣的方面仍模糊不清。这些措施包括申办范围，免疫抑制，过寄生和行为有关的问题。这次演讲的重点是要证明在果蝇的免疫组织感染的影响。这里展示的解剖技术可以用于基因表达分析，RNA水平（ 原位杂交），或在提取核酸芯片或…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们感谢的托德Schlenke教授，教授托尼IP转基因果蝇株，为Trichopria果蝇和教授卡尔桥本反Spätzle抗体。此演示实验室的贡献，我们感谢过去和现在的成员。支持这项工作是由下列补助：（S06 GM08168，高层41399-009，和G12-RR03060），，从国立卫生研究院，美国农业部（野村综合研究所/农业部CSREES 2006-03817和2009-35302-05277）和PSC-纽约市立大学。
Materials
| Materials | Type | Company | Catalog number |
| Materials for insect culture maintenance | |||
| Yeast | Active dry | Fisher Scientific | S802453 |
| Fly food | Corn meal, sugar | Standard recipe | |
| Honey | Clover | Dutch Gold | |
| Vials | Polypropylene shell vials (narrow) | Fisher Scientific | AS514 |
| Vial closures | Cotton plug | Fisher Scientific | AS212 |
| Vial closures | Buzz plug | Genesee Scientific | AS273 |
| Refrigerated incubator | Precision 815 | Thermo Scientific | 3721 |
| Materials for sample preparation | |||
| CO2 tank | Bone dry grade | TW Smith | UN1013 |
| Spatula | Micro spatula (14 cm) | Fisher Scientific | 21-401-15 |
| Pyrex spot test plates | 9-well dissecting plate 85 mm X 100 mm | Thomas Scientific | 7812G17 |
| Pasteur Pipettes | Soda lime | J & H Berge | 71-5200-05 |
| Forceps | Style # 5 | Sigma | T-4662 |
| Ethanol | 190 proof USP | Fisher Scientific | 04-355-221 |
| Formaldehyde | 37% w/w | Fisher Scientific | F79-1 |
| Secondary antibody Cy3 AffiniPure donkey anti-rabbit IgG (H + L) | 1:50 Excitation 546 nm; Emission 565 nm | Jackson Immuno Research Laboratories, Inc. | 711-165-152 |
| Antifade (N-propyl gallate) | 4 μg/ml in 50% glycerol in 1X PBS | MP Biomedicals | 10274790 |
| Glycerol | Fisher Scientific | G33-1 | |
| Hoechst 33258 | 0.2 μg/ml Excitation 352 nm; Emission 461 nm | Molecular Probes | H-1398 |
| Rhodamine phalloidin | 200 units/ml (6.6 μM) Excitation 540 nm; Emission 565 nm | Molecular Probes | R415 |
| Alexa Fluor 488 phalloidin | 300 units/ml Excitation 495 nm; Emission 518 nm | Molecular Probes | A12379 |
| Disposables | |||
| Wash bottle | Fisherbrand | Fisher Scientific | 03-409-22A |
| Kimwipes | Kimberly Clark | Fisher Scientific | 06-666A |
| Paper Towel | 1 ply C-Fold | Quill | 901-7CFTB2400 |
| Microscopy | |||
| Leica stereomicroscope | MZFLIII | Empire Imaging Systems, Inc. | 10446208 |
| Zeiss Stereomicroscope | Stemi 1000 or 2000-C | Carl Zeiss | 000000-1006-126 |
| Light Source – LED | Gooseneck illuminator | Fisher Scientific | 12563501 |
| Stage | Transmitted light box with plate | Carl Zeiss | 455137000 |
| Zeiss laser scanning confocal microscope | LSM 510 | Carl Zeiss | |
| Zeiss compound microscope | Axioplan 2 upright | Carl Zeiss |
| Wasp Strains | Fly Strains |
| Leptopilina victoriae16 | y w |
| Leptopilina boulardi 171 | UAS-GFP-Dorsal17 |
| Leptopilina heterotoma2 | SerpentHemoGal413 |
| Leptopilina heterotoma 141 | MSNF9-moCherry14 |
| Trichopria drosophilae | MSNF-GFP15 |
| Ganaspis xanthopoda18 | y w Serpent-Gal4 UAS GFP-Dorsal/Basc4 |
| y w ; Drosomycin-GFP/CyO y+12 |
References
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