의 양적 비교 CIS - 규제 요소 (CRE) 활동 Drosophila melanogaster</em
Summary
특성에 대한 Phenotypic 변형 CIS – 규제 요소 (CRE) 시퀀스 제어하는 유전자 발현 패턴의 변이에서 발생할 수 있습니다. Drosophila melanogaster에 사용하기 위해 파생된 방법은 양적 수정하거나 자연 발생 CRE 변종으로 인한 유전자 발현의 공간 및 시간적 패턴의 수준을 비교할 수 있습니다.
Abstract
유전자 발현 패턴도 강화 또는 CIS – 규제 모듈이라고 CIS – 규제 요소 (CRE) 시퀀스에 의해 지정됩니다. 전형적인 CRE 어디에, 어떤 수준에서 규제 유전자 (S)가 표시됩니다 때, 지정 규제 논리를 부여하는 몇 가지 전사 인자 단백질에 대한 구속력이 사이트의 배열을 가지고 있습니다. 동물의 게놈 내에서 CREs의 전체 집합은 유기체의 발전 1, 경험적위한 프로그램뿐만 아니라 이론 연구 CREs에 변이가 형태학의 진화 2-4 두드러진 역할을 나타냅니다를 인코딩합니다. 또한, 인간 게놈 넓은 협회 연구 CREs에 유전자 변이가 phenotypic 변화에 크게 기여 5,6 나타냅니다. 따라서, 규제 논리를 이해하고 방법을 돌연변이 같은 논리에 영향을 미칠 것은 유전학의 중심 목표이다.
기자 transgenes은 생체내 FUNC에서 공부하는 강력한 방법을 제공CREs의 기. 여기 알려진 또는 의심되는 CRE 시퀀스는 heterologous 발기인하고 쉽게 관찰할 단백질 제품을 인코딩 리포터 유전자에 대한 코딩 시퀀스로 결합합니다. 기자의 transgene이 숙주에 삽입되면, CRE의 활동은 인코딩된 기자 단백질의 형태로 표시됩니다. transgenes의 게놈 배치가 랜덤입니다하지만 과일 파리 종의 Drosophila (D.) melanogaster 7 P – 요소 중재의 transgenesis,이 모델 생물로 기자 transgenes을 소개하는 수십 년 동안 사용되었습니다. 따라서 리포터 유전자 활동은 강력하고 질적으로 CRE 비교 제한, 지역 염색질 및 유전자 환경에 의해 영향을받습니다. 최근에는 phiC31 기반의 통합 시스템은 특정 게놈의 방문 사이트 8-10에 transgenes를 삽입 D. melanogaster에서 사용하기 위해 적응되었다. 이 기능은 CRE 활동 11-13 FE에게 유전자의 양적 측정을 시도했고, 관련 여기에있다asible. 유전자 변형 과일 파리의 생산이 고가의 장비와 /를 구입하거나 전문 transgene 분사 프로토콜에서 실력을하지 않아도 phiC31 기반의 통합을 포함하여 외주 수 있습니다.
여기서는 일반적인 프로토콜 양적 CRE의 활동을 평가하고,이 접근법은 CRE의 활동에 도입 돌연변이의 효과를 측정하고 orthologous CREs의 활동을 비교하는 데 사용할 수있는 방법을 보여주기를 제시한다. 주어진 예제는 과일 파리 변태 동안 CRE 활성화를위한 있지만, 그 접근 방식은 다른 발달 단계, 과일 파리 종, 또는 모델 생물에 적용할 수 있습니다. 결국, 학습 CREs이 접근 방식보다 널리 사용 규제 논리의 이해를 사전에해야하고 어떻게 논리는 다양하고 진화하실 수 있습니다.
Protocol
Discussion
CIS – 규제 요소는 유전자 발현 패턴 및함으로써 개발 1의 프로세스를 지정 게놈 프로그램을 인코딩하고, 인간의 특징 5,6,19에 대한 형태학의 진화 2-4과 phenotypic 변화를 기본 두 변이에 대한 눈에 띄는 위치하고 있습니다. 이 중요성에도 불구하고, CREs에 대한 규제 논리가 제대로 이해 남아있다. 이 이해 적자에 대한 유명한 이유는 양적 CREs의 기능 시퀀스를 비교하는 ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 감사 : 니콜라 Gompel이 프로토콜의 발전에 그들의 공헌에 대해 벤자민 Prud'homme, 멜리사 윌리엄스와 원고에 대한 덧글에 대한 네 익명으로 검토, 전쟁 연구 장학금을위한 데이튼 대학원 대학, 그리고 데이턴 생물의 대학 부서 및 TMW에 대한 연구 지원을위한 연구소 (UDRI). 이 작품은 TMW로 미국 심장 협회 부여 11BGIA7280000에 의해 지원되었다.
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