माउस रेटिना से transretinal एर्ग रिकॉर्डिंग: रॉड और शंकु Photoresponses के के.
Summary
हम बरकरार माउस रेटिना से रॉड और कोन photoresponses के प्राप्त करने के लिए transretinal electroretinogram (एर्ग) रिकॉर्डिंग का एक अपेक्षाकृत सरल विधि का वर्णन. यह दृष्टिकोण photoreceptors से synaptic प्रसारण के ब्लॉक का लाभ लेता है अपने प्रकाश प्रतिक्रियाओं को अलग करने और उन्हें रिकॉर्ड क्षेत्र फ्लैट घुड़सवार अलग रेटिना भर में रखा इलेक्ट्रोड का उपयोग.
Abstract
छड़ और शंकु: हड्डीवाला रेटिना में दो अलग छवि बनाने photoreceptors के वर्गों रहे हैं. छड़ प्रकाश की फोटॉनों का पता लगाने में सक्षम हैं जबकि शंकु लगातार तेजी से उज्ज्वल प्रकाश स्थितियों को बदलने के तहत संचालित. रॉड और कोन photoreceptors के बाहरी क्षेत्रों में विशिष्ट दृश्य pigments द्वारा प्रकाश के अवशोषण कि अंततः प्लाज्मा झिल्ली और सेल hyperpolarization के पर चक्रीय nucleotide-gated चैनलों को बंद करने के लिए सुराग एक phototransduction झरना हो सके. वर्तमान और संभावित झिल्ली में यह परिवर्तन एक photoresponse प्रकाश प्रेरित के रूप में पंजीकृत किया जा सकता है या तो शास्त्रीय चूषण इलेक्ट्रोड रिकॉर्डिंग तकनीक 1,2 या pharmacologically अवरुद्ध postsynaptic प्रतिक्रिया 3-5 घटकों के साथ अलग retinas के के से transretinal electroretinogram रिकॉर्डिंग (एर्ग) द्वारा. बाद के विधि माउस photoreceptors से दवा सुलभ लंबे समय से स्थायी रिकॉर्डिंग की अनुमति देता है और स्थिर photoresponses fr प्राप्त करने के लिए विशेष रूप से उपयोगी हैओम दुर्लभ और नाजुक माउस शंकु. शंकु के मामले में, इस तरह के प्रयोगों दोनों काले अनुकूलित शर्तों और निम्नलिखित तीव्र रोशनी है कि अनिवार्य रूप से सभी दृश्य रंगद्रव्य bleaches में प्रदर्शन किया जा सकता है, अंधेरे 6,7 अनुकूलन दौरान कोन photosensitivity वसूली की प्रक्रिया की निगरानी. इस वीडियो में, हम दिखा देंगे कि कैसे के काले अनुकूलित माउस रेटिना से रॉड और एम / एल – कोन संचालित transretinal रिकॉर्डिंग प्रदर्शन करने के लिए. रॉड रिकॉर्डिंग जंगली प्रकार (6 / C57BL) चूहों के रेटिना का उपयोग किया जाएगा. चूहों जो 8 संकेत छड़ी की कमी है. सादगी के लिए, शंकु रिकॉर्डिंग से आनुवंशिक रूप से संशोधित रॉड transducin α-सबयूनिट पीटा (- / Tα) प्राप्त किया जाएगा
Protocol
Discussion
रॉड और कोन संचालित transretinal एर्ग रिकॉर्डिंग की विधि ऊपर वर्णित दोनों जंगली प्रकार और आनुवंशिक रूप से संशोधित पशुओं में माउस photoreceptors के समारोह की जांच के लिए एक शक्तिशाली उपकरण बनता जा रहा है. बुनियादी photoresponse स…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
कैरियर रिसर्च से विकास पुरस्कार द्वारा समर्थित अंधापन को रोकने, एनआईएच अनुदान EY19312 और EY19543 (VJK), के रूप में के रूप में अच्छी तरह से रिसर्च से अप्रतिबंधित अनुदान अंधापन और EY02687 (वाशिंगटन विश्वविद्यालय में नेत्र विज्ञान और दृश्य विज्ञान विभाग) को रोकने के द्वारा.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
| DL-AP-4 | TOCRIS bioscience | 0101 | ||
| All other reagents | Sigma-Aldrich | |||
| Glass capillaries | World Precision Instruments | TW100-4 | For making electrodes | |
| Filter paper | HARG | Millipore | HABG01300 | |
| Photometer | UDT Instruments | S350 | For light calibration | |
| Radiometric silicon sensor | UDT Instruments | 221 | For light calibration | |
| Anti-vibration table | Technical Manufacturing Corporation | TMC 78-239-02R, TMC63-26012-01 | To minimize mechanical noise | |
| Air compressor Panther P 15TC | Werther International | P 15TC | Connected to anti-vibration table | |
| Stereomicroscope | LEICA | MZ9.5 | For mouse eye dissection | |
| Infrared image converters | B.E.Meyers | ProwlerTM | Bound to stereomicroscope | |
| Differential amplifier DP-311 |
Warner Instruments | DP-311 | ||
| Axon Digidata 1440A Digitizer | Molecular Devices | 1440A | ||
| Dual Channel 8-pole Filter | KROHN-HITE Corporation | 3382 | ||
| Ceramic resistor | TE Connectivity | CGS SBCHE618RJ | For reheating the perfusion solution | |
| Thermocouple | T | Physitemp Instruments | IT-18 | |
| Temperature monitor | Omega | DPi32 | Connected to thermocouple | |
| LED 505 nm | TT Electronics/ Optek Technology | Digi-key P/N 365-1185-ND | To apply test flashes/bleaching light | |
| Cautery pen | Bovie | AA25 | For marking the dorsal part of the mouse eyeball | |
| pCLAMP 10 Electrophysiology Data Acquisition and Analysis Software | Molecular Devices |
References
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