Använda snabb-scan cykliska voltammetry att mäta elektriskt framkallat presynaptiska dopamin dynamik i striatala hjärnan skivor.
Omfattande forskning har fokuserat på signalsubstansen dopamin på grund av dess betydelse i verkningsmekanismen för missbruksmedel (t.ex. kokain och amfetamin), den roll den spelar i psykiska sjukdomar (t.ex. schizofreni och Attention Deficit Hyperactivity Disorder), och dess engagemang i degenerativa sjukdomar som Parkinsons och Huntingtons sjukdom. Under normala fysiologiska förhållanden är dopamin känt att reglera rörelseaktivitet, kognition, inlärning, emotionell påverkar och neuroendokrina hormon. En av de största tätheten av dopaminneuron är inom striatum, som kan indelas i två olika neuroanatomiska regionerna kallas kärnan accumbens och nucleus caudatus och putamen. Målet är att belysa ett generellt protokoll för bit snabb skanning cyklisk voltammetry (FSCV) inom musen striatum. FSCV är en väldefinierad elektrokemisk teknik som ger möjlighet att mäta dopamin utsläpp och upptag i realtid i discrete hjärnan. Kolfiber microelectrodes (diameter på ~ 7 mikrometer) används i FSCV att upptäcka dopamin oxidation. Den analytiska Fördelen med att använda FSCV att upptäcka dopamin är dess bättre tidsupplösning på 100 millisekunder och rumsliga upplösning på mindre än tio mikrometer, vilket ger kompletterande information in vivo mikrodialys.
Protokollet presenteras här visar hur man förbereder och använder musen koronala hjärnan skivor för FSCV experiment. Även om denna metod är specifik för att erhålla och mäta dopamin dynamik, adenosin andra signalsubstanser som har väteperoxid, noradrenalin och serotonin övervakats in vivo eller in vitro med FSCV 3, 8 – 11. FSCV kan användas för att övervaka några av dessa andra neurochemicals genom enkla ändringar av vågformen tillämpas på arbete elektroden 3, 11.</s…
The authors have nothing to disclose.
Finansiering från National Institute on alkoholmissbruk och alkoholism (NIAAA, AA-016.967 och AA016967-01S1, TAM), Wayne State University starta fonder, och Wayne State University Research Grant Program. Innehållet är ensamt ansvarig för författare och utgör inte officiella ståndpunkter NIAAA eller National Institutes of Health.
Name | Company | CAS number |
Reagent |
||
Potassium Chloride |
Fisher | 7447407 |
Sodium chloride |
EMD Chemicals | 7647145 |
Magnesium chloride |
Fisher |
7791186 |
Calcium chloride |
Fisher |
10035048 |
Sodium bicarbonate |
EMD Chemicals |
144558 |
Sodium phosphate,Dibasic |
EMD Chemicals |
7558794 |
D-glucose |
Fisher |
50997 |
Ascorbic acid |
Fisher |
50817 |
Sucrose |
Fisher |
57501 |
|
|
|
Materials |
Vendor |
Catalogue number |
Carbon fiber |
Goodfellow Oakdale, PA | |
Glass capillary |
A-M Systems Carlsborg WA. | 602000 |
Silver wire |
A-M Systems Carlsborg WA. | 787000 |
Tungsten stimulating electrode |
Plastics One, Roanoke, VA | |
Platinum wire |
||
Lead wire |
Squires Electronics, Cornelius, OR | |
Loctite 404 instant adhesive |
Hankal Corp. Rocky Hill CT. |
|
Razor blade |
World precision Instruments Inc. FL. | |
BD Spinal needle |
BD Medical systems, Franlin Lake, NJ |
REF 405234 |
Surgical Blade |
Feather Safety razor Co. LTD. Japan | |
|
||
Software |
Vendor |
Catalogue number |
TH software |
ESA Inc.,Chelmsford, MA | |
Instrument |
Vendor |
Catalogue number |
Submersion recording chamber |
Custom Scientific, Denver, CO | |
Neorolog stimulus isolator |
Digitmeter, Hertfordshire, England | |
Automatic temperature controller |
Warner Instrument Corporation | |
Microscope (SZX7) |
Olympus | |
Microscope |
Fisher | |
Vibratome 3000 sectioning system |
St. Louis , MO. | |
Perfusion pump |
Watson Marlow Limited, Falmouth Cornwall – England | H110708 |
Micropipette puller |
Narishige, Tokyo, Japan | |
ChemClamp potentiostat |
Dagan Corporations, Minneapolis, MN. |