Inactivation génique médiée par ARNi et<em> In Vivo</emEssai diurèse> Femmes adultes<em> Aedes aegypti</em> Les moustiques
Summary
Dans ce protocole, nous combinons silencing RNAi-médiée avec un gène<em> In vivo</emDosage diurèse> pour étudier l'effet de choc effets de gènes d'intérêt a sur l'excrétion de liquide moustiques.
Abstract
Ce protocole vidéo montre une technique efficace pour effet de choc d'un gène particulier dans un insecte et de mener un essai biologique roman pour mesurer le taux d'excrétion. Cette méthode peut être utilisée pour obtenir une meilleure compréhension du processus de la diurèse chez les insectes et est particulièrement utile dans l'étude de la diurèse dans le sang d'alimentation arthropodes qui sont en mesure de prendre d'énormes quantités de liquide dans un repas de sang unique.
Cette inactivation génique médiée par ARNi combiné avec un test in vivo diurèse a été développé par le laboratoire Hansen pour étudier les effets de l'ARNi à médiation knockdown de gènes d'aquaporines sur moustique Aedes aegypti diurèse 1.
Le protocole est configuré en deux parties: la première démonstration illustre comment construire un dispositif simple moustique injection et comment préparer et injecter ARNdb dans le thorax de moustiques pour inactivation génique médiée par ARNi. La deuxième démonstration illustre comment déterminerles taux d'excrétion chez les moustiques en utilisant un dosage biologique in vivo.
Protocol
Discussion
Le protocole utilisé ARNi a été développé dans le laboratoire d'Alexandre Raikhel à l'Université de Californie Riverside 6,7 et est semblable à un protocole publié par Garver et Dimopoulos 4. L'approche expérimentale montré dans ce protocole vidéo peut être utilisée pour étudier les gènes impliqués dans la diurèse des insectes dans un cadre en vivo. Les organes excréteurs des insectes, les tubes de Malpighi, ont attiré l'intérêt des générations de ch…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier Victoria Carpenter pour ses commentaires critiques de ce protocole.
Materials
| Name of reagent or equipment | Company | Catalogue number | Comments |
| MEGAscript T7 High Yield Kit | Ambion, Inc. | AM1334 | |
| PBS buffer | Sigma-Aldrich | P4417 | |
| Plastic tubing | Local vendor | PVC | |
| 1 ml plastic pipette tip | VWR | 83007-376 | Blue tip |
| 1 ml syringe | Becton, Dickinson and Company | 309602 | |
| Scissors | Local vendor | ||
| Metal needle | Carolina Biologicals | 654307 | Size 5 |
| Fly pad | Genesee Scientific | 789060 | |
| Battery-powered aspirator w/ collection vial | UPMA Labs | IPMM 2000 | |
| Fine tip forceps | World Precision Instruments | 14095 | |
| Glass capillary needles | World Precision Instruments | 1B200-6 | |
| Stereo dissection microscope | Leica Microsystems | S6D | |
| Analytical precision balance | Mettler Toledo | AB54S | |
| Sucrose | Sigma-Aldrich | 84097 | |
| One pint waxed lined cardboard cups | Local vendor | Manufactured soup cups | |
| Mesh net | Local vendor | plastic fly gauze |
References
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