脾臓の生体顕微鏡検査：寄生虫モビリティと血流の定量的解析
Summary
我々は、GFPトランスジェニックマラリア原虫を用いて脾臓の生体顕微鏡検査を実施するための方法およびこの器官内の寄生虫のモビリティと血流の定量化を示す。
Abstract
実験的なげっ歯類のマラリアモデルにおける生体顕微鏡の出現は、寄生虫-宿主相互作用の1,2の知見に大きな進歩を可能にした。このように、前赤血球段階でマラリア原虫のin vivoイメージングで皮膚のリンパ節3、皮膚の4の寄生虫の完全な開発、および移行を確保するために、肝細胞由来のmerosomeの形成に寄生虫のアクティブな入り口を明らかにしたと血流5にメロゾイト放出。また、赤血球内の個々の寄生虫の開発は、最近の4Dイメージングを使用して文書化し、マラリア6のタンパク質輸送上の私たちの現在のビューに挑戦されています。従って、生体内イメージングは根本的にマラリア原虫の開発における重要なイベントに関する我々の見解を変更しました。残念なことに、脾臓、主要なリンパ器官を通じて、マラリア原虫のダイナミックなパッセージの研究は、絶妙に感染した赤のBをクリアするように適応lood細胞は、技術的な制約のために不足している。
Balb / cマウスにおけるマラリア原虫yoeliiのマウスモデルを用いて、我々は、脾臓の生体内イメージングを実施し、中に赤い果肉の繊維芽細胞由来の障壁の細胞にそれと寄生された赤血球の付着（pRBCs）の差動リモデリングを報告している非致死的な寄生虫ラインP.yoelii 17倍の感染は、P.yoelii 17XL致死寄生虫の7行目で感染することに反対した。これらの結論に到達するには、ImageJのフリーソフトを使用して、特定の方法論は、シングルpRBCsの高速三次元運動の特性評価を可能にするために開発されました。このプロトコルを用いて得られた結果は、脾臓の寄生虫の速度、方向性と滞留時間を決定する生体内での遵守に取り組むすべてのパラメータを許可する。さらに、我々は、血流の生体顕微鏡を用いて定量化し、差を使用するための方法論を報告する脾臓の複雑な微小構造への洞察を得るためにferent着色剤。
倫理の文
すべての動物実験は、バルセロナCEEA – UB（：5429プロトコルなしDMAH）の大学の動物実験のために倫理委員会で承認されたガイドラインとプロトコルに準拠して、バルセロナ大学の動物施設で実施した。年齢の6-8週の雌BALB / cマウスはチャールズリバー研究所から入手した。
Protocol
Discussion
このげっ歯類のマラリアモデルにおける脾臓の生体顕微鏡検査の実装は、これまで技術的な考慮事項に"ブラックボックス"が原因と考えられているこの器官を通じて寄生虫の動的な経過を調査の可能性を開いた。ここでは、主要な努力は、単一および人口のレベルで異なる寄生虫の行の比較分析を可能にする定量的手法を適応する置かれた。マラリア3,5の前にイメージングさ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
私たちはA.ボッシュ（コンフォーカルユニット、CCIT – UB、IDIBAPS）に、GFPトランスジェニック原虫の寄付のためにJ.バーンズに、マラリア原虫の生体顕微鏡で初期訓練と継続的な入力のためのS. GraeweとV. Heusslerに特に感謝しています画像解析と技術支援のための定量化とP. Astolaへの支援のための。我々は、R.のトウスとビデオ制作のためのI.のCaraltに感謝。 MFは、カタルーニャの一般性から大学院生フェローシップの受賞者です。 HAPはICREAの研究教授である。 HAPの実験室での作業は、民間財団セレックス（カタルーニャ、スペイン）により、科学とイノベーションのスペイン省が、補助金協定Nの下で欧州共同体のセブンス枠組み計画（FP7/2007-2013）° 242095によって資金を供給される（ SAF2009 – 07760）。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Leica TCS-SP5 confocal microscope | Leica Microsystems, Heidelberg, Germany | TCS-SP5 Serial no. 5100000419 | |
| Ketamine (Ketolar 50 mg/ml) | Pfizer | 631028 | |
| Midazolam 15 mg/3 ml | Normon | 838193 | |
| 70,000 MW Dextran, conjugated to Texas Red | Molecular Probes | D1830 | |
| Fluorescein Isothiocyanate, isomer I (FITC) | Sigma | F7250 | |
| Hoechst 33342 | Sigma | H1399 | |
| Giemsa stain | Sigma | GS1 | Working solution is at 10% in distilled water |
| Super Glue-3 Loctite | Loctite | 9975-0880 |
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