调查在DSS诱导的鸡传染性法氏囊病模型的肠道炎症
Summary
发炎性肠道疾病的实验模型使我们能够研究与发病机制相关的复杂的先天免疫和适应性免疫反应。使用组织学评分，量化促炎性细胞因子和髓过氧化物酶活性，就可以开始评估在炎症性肠病看到这些答复。
Abstract
炎症性肠病（IBD）的涵盖了肠道病症的范围，其中最常见的是溃疡性结肠炎（UC）和克罗恩病（CD）。 UC和CD，在结肠，产生类似的症状轮廓包括腹泻，直肠出血，腹痛，体重减轻（1）尽管鸡传染性法氏囊病的发病机制尚不清楚，它被描述为一种多因素疾病，同时涉及遗传和环境的组成部分。
有纷繁多变的结肠炎动物模型类似于鸡传染性法氏囊病的几个特点。结肠炎范围内的动物模型，从自发产生的，在某些物种敏感菌那些需要特定的浓度结肠炎诱导的化学品，如葡聚糖硫酸盐钠（DSS），管理。化学诱导的肠道炎症模型鸡传染性法氏囊病中最常用的最好的描述的模型。 ADMINI饮用水中的决策支持系统的习作产生急性或慢性结肠炎，根据管理协议。DSS展品重量损失，便溏或腹泻的迹象的动物， 有时与直肠出血的证据。4,5在这里，我们描述的方法结肠炎的发展和由此产生的炎症反应的特点可以下列管理决策支持系统的。这些方法包括苏木/ HE染色结肠部分的组织学分析，促炎性细胞因子的测量，测定髓过氧化物酶（MPO）活性，可作为替代标记炎症6。
在疾病状态下的炎症反应的程度进行评估临床症状，或由粘膜组织的组织学改变。结肠组织学损害是通过使用计分制度，认为地穴建筑，炎性细胞浸润，肌肉吨损失评估hickening，杯状细胞消耗和隐窝脓肿7定量，促炎性细胞因子与急性发炎的特性，如白细胞介素（IL）-1β，IL – 6和肿瘤坏死因子（TNF）-α，水平可确定使用传统的ELISA方法。此外，MPO活性，可使用比色法测量和炎症指数。8
在实验性结肠炎，疾病的严重程度往往与MPO活性和促炎性细胞因子的水平较高的增长。结肠炎的严重程度和炎症相关的损害，可以通过检查大便的一致性和出血，除了评估使用肠道苏木/ HE染色结肠组织切片的病理组织学状态评估。可用于结肠组织碎片，以确定MPO活性及细胞因子的产生。两者合计，这些措施可以用来评估肠道炎症反应实验性结肠炎动物模型。
Protocol
1。 DSS诱导的急性结肠炎的小鼠模型添加葡聚糖硫酸盐钠（DSS）蒸压饮用水所需的最终浓度（1-5％）（WT /卷）（即5％的DSS解决方案，添加25毫克的DSS粉蒸压水500毫升） 。联合解决方案可以在室温下长达一周或4℃直至使用。 在生物安全罩，倒入50毫升猎鹰管（每笼所需）股票DSS解决方案。保持股票笔芯管的解决方案，在需要的时候。 每个鼠笼更换饮用水与DSS解决方案（50毫升…
Discussion
DSS结肠炎是广泛使用的一种化学诱导肠道炎症模型。在这个模型中，小鼠的饮用水辅以决策支持系统，这被认为是有毒的肠上皮细胞，破坏粘膜屏障的完整性。10 DSS的管理引起的一种急性结肠炎，大便溏，大便出血，与粒细胞浸润。10在直资管理，结肠炎通常伴有明显消瘦和粪便中存在的血液，它可以由粪便隐血试验评估。5.10,11收集结肠组织样品后，结肠炎的严重程度可…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由加拿大卫生研究院（CIHR）的赠款和克隆氏病和结肠炎基金会（CCFC）加拿大支持。
Materials
| Name of reagent/equipment: | Company | Catalogue number | Comments |
| Eppendorf Safe-Lock Microcentrifuge Tube (2mL) | eppendorf | 0030 120.094 | |
| Biotek EL808 Absorbance plate reader | Biotek | EL808 | |
| Dextran sulphate sodium salt reagent grade (molecular weight 36,000-50,000 Da) | MP Biomedicals | 160110 | |
| Gen5 (software) | Biotek | Version 1.10.8 | |
| Hexadecyltrimethylammonium bromide (HTAB) | Sigma-Aldrich | H5882-100G | |
| Hydrogen peroxide, 30 wt.% solution in water | Sigma-Aldrich | 216763 | Store at 2-8°C |
| Microtest plate 96-well flat bottom | Sarstedt | 82.1581 | For single use only |
| o-Dianisidine | Sigma-Aldrich | D-3252 | Light sensitive. Store at 2-8°C |
| Potassium phosphate, dibasic | Caledon | 6620-1 | |
| Potassium phosphate, monobasic | EMD Chemicals | PX1565-1 | |
| Protease inhibitor cocktail | Sigma-Aldrich | P8340 | Store at -20°C |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | |
| Tungsten Carbide beads for Tissue Lyser II | QUIAGEN | 69997 |
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Intestinal InflammationDSS-induced ModelIBDUlcerative ColitisCrohn’s DiseasePathogenesisGeneticEnvironmental ComponentsAnimal ModelsColonic InflammationDextran Sulphate SodiumColitis-inducing ChemicalsAcute ColitisChronic ColitisWeight LossLoose StoolDiarrheaRectal BleedingHistological AnalysisPro-inflammatory Cytokines
Cite This Article
Kim, J. J., Shajib, M. S., Manocha, M. M., Khan, W. I. Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD. J. Vis. Exp. (60), e3678, doi:10.3791/3678 (2012).