人間の茸状の味覚乳頭細胞の単離および培養
Summary
我々は人間の茸状乳頭味細胞の長期培養を分離して維持するための再現可能なプロトコルを開発することを目的とした。生検で得られたヒト茸状乳頭由来の細胞が正常に生存率の低下なしに個以上の通路（12ヶ月）培養で維持した。
Abstract
味細胞は、食品中に含まれる単純な刺激と複雑な化学分子の広い範囲の検出を可能にするユニークな組織学的、分子生物学的および生理学的特性を持つ、高度に特殊化されています。ヒトでは、個々の茸状乳頭はゼロから多くの20の味蕾に含まれています。複数のセルサイクルの文化の味覚乳頭細胞を維持する能力は、これらのユニークな感覚細胞の、分子の再生、および機能的性質を特徴づけるためにかなりのユーティリティのでしょうが培養ヒトの味覚細胞のための確立されたプロトコルは、ありません。味細胞の以前の研究はげっ歯類、または組織切片1,2,3,4の半そのままの味蕾から、初代培養の外植片培養を新たに単離された細胞を使用して行われている。これらの製剤のそれぞれの利点がありますが、長期的な文化の発展は、特に味細胞の増殖とdiffeの研究に、大きなメリットを提供しているだろうrentiation。我々を含むいくつかのグループが、味細胞培養モデルの開発と確立に興味を持っています。文化の味細胞にほとんどの試みは3-5 D 5,6,7,8を超えて一般的に長続きしない細胞と、限られた可能性が報告されています。我々は最近、9齧歯類の味細胞の拡張された文化のために成功した方法を報告した。我々はここで初めて単離されたヒト茸状乳頭味細胞のin vitroの培養系の確立を報告します。生検で得られたヒト茸状乳頭由来の細胞が正常に生存率の低下なしに個以上の通路（12ヶ月）培養で維持した。細胞が成熟した味細胞の特徴多くの分子的および生理学的機能を表示します。 GustducinとホスホリパーゼCβ2、（PLC-β2）mRNAが逆転写酵素 – ポリメラーゼ連鎖反応によって、多くの細胞で検出され、配列決定によって確認した。免疫細胞化学分析では、突風の存在を実証ducinおよびPLC-β2培養味細胞における発現。培養ヒト茸状細胞は、味覚受容体とシグナル伝達経路の少なくとも一部が存在していたことを示すいくつかの味刺激の適切な濃度に応答して細胞内カルシウムの増加を示した。これらの結果は、十分な成人から味細胞が生成され、少なくとも8つの通路を維持できることを示しています。細胞の多くは、モデルの味覚システムとしての使用をサポートするために、大人の味の上皮から急性単離した細胞の生理学的および生化学的特性を保持します。このシステムは、in vitroでの準備中で哺乳類の味覚受容体細胞の増殖、分化および機能に関与するプロセスの更なる研究が可能になります。
ヒトの茸状細胞の培養を確立するために使用される人間の茸状乳頭味が見直された研究プロトコルの下で適切なインフォームドコンセント後に研究のために寄付されましたとIRB委員会によって承認されました。プロトコル（＃0934）は、シュルマンアソシエイツ機関審査委員会（株）、シンシナティ、オハイオ州によって承認されました。下記の書かれたプロトコルはOzdener らによって報告され公表されたパラメータに基づいています。 2011年10。
Protocol
Discussion
私たちは12ヶ月の期間にまたがる、8以上の通路のために人間の茸状乳頭味から得られた細胞を維持しています。これらの培養物は、味覚受容体細胞の重要な分子的及び生理学的性質に加えて、成熟した味蕾細胞の種類にはいくつかのマーカーを発現した段階にin vitroで成熟し、その多くは新しい細胞を生成します。 gustducinと培養細胞のサブセットのPLC-β2免疫反応の存在は、この結論と…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
私たちは、エイミー·マイヤーズと技術的なスキルとヘルプのESI Quaysonに感謝します。この作品は、NSF 0216310とジボダン社の助成金（NER）によって部分的にサポートされていました。
Materials
| Name of the reagent | Company |
| MCDB 123 | Sigma-Aldrich |
| Iscove’s DMEM Medium | MediaTech |
| Elastase | Sigma-Aldrich |
| Pronase E | Sigma-Aldrich |
| Elastase | Worthington |
| Soy bean trypsin inhibitor | Worthington |
| Collagenase type 1 | Worthington |
| Rat tail collagen type 1 | BD Sciences |
| Fura-2 AM | Molecular Probes |
| Superscript First Strand Synthesis System for RT-PCR | Invitrogen |
| Leica TCS SP2 Spectral Confocal Microscope | Leica Microsystems Inc. |
| Discovery-1 imaging station and Metamorph software | Molecular Devices |
| Small fine-tip forceps and extra fine spring scissors | Fine Science Tools |
References
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